[发明专利]一种基于生物正交反应的定向抗体固定化方法

权利要求书

1.一种基于生物正交反应的定向抗体固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1：重组表达技术，引入具有生物正交反应活性的酶作为标签，与需要固定的抗体通过融合的方式连接得到融合酶标签的抗体；

步骤S2：聚苯乙烯表面的活化，高纯度的融合酶标签的抗体进一步和烷基卤脱卤酶底物6-氯己烷反应形成共价键，制备成表面功能化的载体表面；

步骤S3：将带有烷基卤脱卤酶标签的抗体溶液与修饰有烷基卤脱卤酶底物的固相载体表面共同孵育，通过烷基卤脱卤酶与底物6-氯己烷的生物正交反应实现抗体功能化固相载体表面的一步共价键固定化；

步骤S4：通过扫描电镜、表面元素分析、荧光显微镜表征和验证表面修饰的密度和分布。

2.根据权利要求1所述的一种基于生物正交反应的定向抗体固定化方法，其特征在于：在所述步骤S1中，通过蛋白纯化技术获得高纯度的融合酶标签的抗体。

3.根据权利要求1所述的一种基于生物正交反应的定向抗体固定化方法，其特征在于：在所述步骤S1中，选用烷基卤脱卤酶作为固定化标签融合到抗体的N末端。

4.根据权利要求1所述的一种基于生物正交反应的定向抗体固定化方法，其特征在于：在所述步骤S1中，通过不同长度的GS间隔臂连接抗体和烷基卤脱卤酶，进行整体表达与纯化。

5.根据权利要求1所述的一种基于生物正交反应的定向抗体固定化方法，其特征在于：所述步骤S4之后进行产品测试，选用抗牛血清白蛋白BSA的单克隆抗体作为对象，设计夹心ELISA实验。

6.根据权利要求5所述的一种基于生物正交反应的定向抗体固定化方法，其特征在于：测试基于包被抗体定向固定化技术的夹心ELISA试剂盒对0-100纳克范围BSA复杂样品的检测灵敏度、特异性、精确性和稳定性，并与常规通过非特异性吸附方法制备的ELISA试剂盒进行比较。

7.根据权利要求1所述的一种基于生物正交反应的定向抗体固定化方法，其特征在于：在所述步骤S2中聚苯乙烯表面的活化时，在臭氧环境中对所述聚苯乙烯表面进行紫外照射处理。

8.根据权利要求1所述的一种基于生物正交反应的定向抗体固定化方法，其特征在于：所述步骤S2中，对聚苯乙烯表面活化形成羟基表面，通过两步化学修饰连接上烷基卤脱卤酶的底物。

9.根据权利要求8所述的一种基于生物正交反应的定向抗体固定化方法，其特征在于：第一步化学修饰反应条件为，加入氨丙基三乙氧基硅烷和甲苯室温条件下反应1-3小时。

10.根据权利要求8所述的一种基于生物正交反应的定向抗体固定化方法，其特征在于：第二步化学修饰反应条件为，加入氯乙酸、DEA、DMF和HATU室温条件下反应1-3小时。