[发明专利]抗非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体、制备方法及B细胞表位筛选和鉴定

说明书

本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体、制备方法及B细胞表位筛选和鉴定，属于基因工程技术领域，本发明设计并构建能够稳定表达ASFV p30蛋白的H22细胞株和HEK293T细胞株，以稳定表达p30蛋白H22细胞作为免疫原免疫小鼠，利用细胞融合技术，以稳定表达p30蛋白HEK293T细胞作为检测原，通过免疫过氧化物酶单层细胞试验，筛选得到抗ASFV p30蛋白的单克隆细胞株10D7，该细胞株产生的单克隆抗体可特异性识别并结合p30蛋白上的¹⁷¹YGTPLKEEEK¹⁸⁰至¹⁷⁶KEEEKEVVRL¹⁸⁵序列区域，有助于了解抗原‑抗体之间的相互作用，对ASFV的检测和诊断具有重要意义。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种抗非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体、制备方法及B细胞表位筛选和鉴定。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus,ASFV)引起的一种以高热、多脏器出血肿大为典型特征的，致死性极高的接触性传染性疾病，该病对动物健康、食品安全、国民经济和环境构成严重的威胁。ASFV是一种大型核质病毒，该病毒的基因组由170-190kb的双链DNA组成，两端为可变区，中间有125kb左右的保守区，左端长约35kb，右端长约15kb。这些串联的重复序列通过共价键将双链DNA联结在一起。该病毒的基因组含有151-167个开放阅读框(Open Reading Frames,ORFs)。ASFV是一种复杂的多层二十面体状病毒粒子，使用质谱技术鉴定到68种不同的蛋白成分和与病毒相关的21种宿主细胞蛋白。

在组成ASFV的结构蛋白中，p30是重要的抗原结构蛋白之一，并在病毒感染宿主细胞的早期表达，它是由CP204L基因编码的相对分子量为30kDa的蛋白。p30是最重要的抗原结构蛋白之一，参与ASFV进入细胞，并阻碍宿主细胞的转录和翻译。一般在病毒感染后2h至4h左右可以观察到p30蛋白的表达，然后持续存在于整个感染周期中。因此，该蛋白的表达表明病毒已经感染宿主细胞，且已开始病毒早期蛋白的表达。因p30具有高度的免疫原性，所以常被作为ASF诊断和监测的血清学候选蛋白。因此，开发p30蛋白特异性单克隆抗体，并进一步筛选p30蛋白抗原表位，对深入研究p30蛋白生物学功能具有重要意义，也将有助于开发针对ASFV的检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体、制备方法及B细胞表位筛选和鉴定，以解决上述现有技术存在的问题，该单克隆抗体能够特异性识别非洲猪瘟病毒p30蛋白上的¹⁷¹YGTPLKEEEK¹⁸⁰至¹⁷⁶KEEEKEVVRL¹⁸⁵序列区域，这是首次报道的B细胞表位。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种非洲猪瘟病毒p30蛋白的抗原表位，该抗原表位位于p30蛋白的171-180和176-185位上，其氨基酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。

本发明还提供如上述的抗原表位在制备非洲猪瘟病毒p30蛋白的单克隆抗体中的应用。

本发明还提供与上述的非洲猪瘟病毒p30蛋白的抗原表位特异性结合的抗非洲猪瘟病毒p30蛋白的单克隆抗体。

进一步地，该单克隆抗体的重链可变区的CDR-H1为SEQ ID No.3所示的氨基酸序列，CDR-H2为SEQ ID No.4所示的的氨基酸序列，CDR-H3为SEQ ID No.5所示的氨基酸序列；以及

该单克隆抗体的轻链可变区的CDR-L1为SEQ ID No.6所示的氨基酸序列，CDR-L2为SEQ ID No.7所示的氨基酸序列，CDR-L3为SEQ ID No.8所示的氨基酸序列。