[发明专利]葡萄糖触发的活性氧响应注射型复合水凝胶的制备方法

权利要求书

1.葡萄糖触发的活性氧响应注射型复合水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

制备获得主链具有苯硼酸的透明质酸-氨基苯硼酸衍生物HA-g-PBA和丙烯酸基修饰的葡萄糖氧化酶衍生物GOx-AC；

利用巯基苯硼酸的巯基与GOx-AC的丙烯酸酯基进行迈克尔加成反应，制备获得带有苯硼酸葡萄糖氧化酶衍生物GOx-g-PBA；

通过GOx-g-PBA的羟基与聚乙烯醇的羟基形成硼酸酯动态共价键，制备获得修饰有葡萄糖氧化酶的聚乙烯醇衍生物PVA-g-GOx；

将HA-g-PBA与PVA-g-GOx按预设比例混合后通过形成硼酸酯动态共价键，制备获得葡萄糖触发的活性氧响应注射型复合水凝胶。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备获得主链具有苯硼酸的透明质酸-氨基苯硼酸衍生物HA-g-PBA和丙烯酸基修饰的葡萄糖氧化酶衍生物GOx-AC中，所述GOx-AC的制备方法为：

将葡萄糖氧化酶溶解在第一缓冲溶液中以配置成所述葡萄糖氧化酶的质量百分比为0.5％-1.5％的第一溶液中；

将N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺溶于二甲基亚砜中，获得第二溶液，其中，所述N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺与所述葡萄糖氧化酶的摩尔比为15-25:1；

将所述第二溶液施加至所述第一溶液中，且在室温下进行搅拌，透析提纯后得到所述GOx-AC。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述利用巯基苯硼酸的巯基与GOx-AC的丙烯酸酯基进行迈克尔加成反应，制备获得带有苯硼酸的葡萄糖氧化酶衍生物GOx-g-PBA，包括如下步骤：

将4-巯基苯硼酸溶于二甲基亚砜中，获得第三溶液，其中，所述4-巯基苯硼酸与所述葡萄糖氧化酶的摩尔比为15-25:1；

将所述第三溶液施加至所述GOx-AC中，并在30℃-37℃下进行搅拌，再透析提纯得到所述GOx-g-PBA。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述通过GOx-g-PBA的羟基与聚乙烯醇的羟基形成硼酸酯动态共价键，制备获得修饰有葡萄糖氧化酶的聚乙烯醇衍生物PVA-g-GOx，包括如下步骤：

将聚乙烯醇溶于第二缓冲液中以配置成所述聚乙烯醇的质量百分比为3％-10％的第四溶液中；

将所述GOx-g-PBA施加至所述第四溶液中，并在室温下进行搅拌，透析提纯后得到所述PVA-g-GOx。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述将HA-g-PBA与PVA-g-GOx按预设比例混合后通过形成硼酸酯动态共价键，制备获得葡萄糖触发的活性氧响应复合水凝胶，包括如下步骤：

将质量比为0.5-2:1的所述HA-g-PBA和所述PVA-g-GOx溶于第三缓冲液中，配置成第五溶液；

按照体积比为1:1的所述第五溶液通过双组份注射器进行混合注射，得到溶液在30℃-37℃下反应交联生成所述活性氧响应注射型复合水凝胶。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选择为磷酸溶液。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述制备获得主链具有苯硼酸的透明质酸-氨基苯硼酸衍生物HA-g-PBA和丙烯酸基修饰的葡萄糖氧化酶衍生物GOx-AC，包括如下步骤：

配置质量百分比为0.2％-2％的透明质酸水溶液和质量百分比为0.5％-1.5％的4-氨基苯硼酸的二甲基亚砜溶液；

将透明质酸水溶液、所述4-氨基苯硼酸的二甲基亚砜溶液和1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二酰亚胺盐酸盐进行混合，再将混合后的溶液的pH值调节至4.5-5，得到第六溶液；

向所述第六溶液中加入N-羟基琥珀酰亚胺，反应透析提纯后冻干保存，得到所述HA-g-PBA。