[发明专利]一种LncRNA TUG1靶向调控hsa-miR-4638-3p的方法

权利要求书

1.一种鉴定Hsa-miR-4638-3p与LncRNA TUG1的结合位点的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、野生型TUG1双报告载体构建；和

含有突变第一结合位点的载体构建；

或者含有突变第二结合位点的载体构建；

或者含有突变第一结合位点和突变第二结合位点的双突变载体构建；

野生型TUG1双报告载体的第一结合位点的序列为图4中上图所示：tgtccagg；

突变第一结合位点的序列为图5中所示：gagttcaa；

野生型TUG1双报告载体的第二结合位点的序列为图4中下图所示：tgtccag；

突变第二结合位点的序列为图6中所示：gagttca；

步骤2、Hsa-miR-4638-3p与质粒共转染293T细胞

采用阳离子脂质体法进行细胞转染；

步骤3、Lucifersae检测

对步骤2获得的样品进行Luciferase活性检测，根据Luciferase表达活性确定Hsa-miR-4638-3p与LncRNA TUG1的结合位点。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中野生型TUG1双报告载体构建所用的扩增引物序列为：

TUG1-XhoIF：

5'CCGCTCGAGTGGTGCTCACCAAGTGGTACAGCCCTAAGC 3'；

TUG1-NotIR：

5'ATAAGAATGCGGCCGCGAAGAAATGAAATGCACACTCATGGAAC 3'。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中含有突变第一结合位点的载体构建所用的扩增引物序列如下：

mutTUG1-1F：

5'GGCAAAACATGAGAGAGTTCAAATTGGAGGTTGAAAAGATTTCACTACAGTGTTCTG 3'；

mutTUG1-1R：

5'TTTTCAACCTCCAATTTGAACTCTCTCATGTTTTGCCACAGAATTTCAAGCTTTGAG 3'。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中含有突变第二结合位点的载体构建

所用的扩增引物序列如下：

mutTUG1-2F：

5'GAAGACCTGAGTTTCGAGTTCAACCCTCAGTGCAAACTGAGGATGCTCCATCCAAAG 3'；

mutTUG1-2R：

5'GCACTGAGGGTTGAACTCGAAACTCAGGTCTTCTAATTCCCAGTAACAGTGCTGGTG 3'。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中含有突变第一结合位点和突变第二结合位点的双突变载体构建所用的扩增引物序列如下：

mutTUG1-2F：

5'GAAGACCTGAGTTTCGAGTTCAACCCTCAGTGCAAACTGAGGATGCTCCATCCAAAG 3'；

mutTUG1-2R：

5'GCACTGAGGGTTGAACTCGAAACTCAGGTCTTCTAATTCCCAGTAACAGTGCTGGTG 3'。