[发明专利]EphA2嵌合抗原受体以及其用途

说明书

本发明涉及特异性结合EPHA2的新型嵌合抗原受体以及其用途。

本发明一般地涉及被工程化以表达EphA2嵌合抗原受体(CAR)的T细胞用于治疗与EphA2的表达相关的疾病的用途。

发明背景

胶质母细胞瘤(Glioblastoma，GBM)是人类最常见、最具侵袭性的原发性恶性脑肿瘤，大多数病例恶性程度比较高。由于高发病率、高死亡率和低治愈率，GBM在世界范围内造成了巨大的社会和医疗负担，而且几乎无法用传统的治疗方法治愈，因此患者总体生存期很不理想。具体而言，目前现有的标准化治疗策略，是最大安全限度的手术切除肿瘤，术后同步放疗和化疗，以及随后六个月的替莫唑胺辅助化疗的标准治疗方案。然而，患者平均生存期仅为14.6个月。

因此，有必要开发治疗GBM的新方法，以改善GBM患者的预后。

嵌合抗原受体(CAR)修饰的T细胞为治疗GBM提供了一种新的途径，它突破了抗原需要被MHC分子呈递的限制，克服了血脑屏障的障碍。CAR是一种人工合成的分子，通过特异性识别肿瘤细胞表面表达的抗原来引导T细胞清除肿瘤。CAR的结构包括细胞外肿瘤抗原结合区、铰链区、跨膜区和细胞内信号域。表达CAR的T细胞可以通过胞外区的单链可变区(ScFv)直接识别肿瘤相关抗原，然后激活细胞内信号转导，释放穿孔素、颗粒酶、干扰素-γ和肿瘤坏死因子等多种细胞因子，诱导肿瘤细胞凋亡。因此，CAR-T细胞以非MHC依赖的方式发挥作用，巧妙地结合了抗体特异性识别抗原的能力和T淋巴细胞的细胞毒作用。CAR T细胞治疗首次应用于血液系统B细胞恶性肿瘤的治疗，取得了良好的效果。美国和欧洲已有两种治疗血液系统恶性肿瘤的新药(Kymrial和Yescata)。然而，CAR T细胞治疗实体瘤的效果并不确切，大多仍处于研究和实验阶段。

其中，一些治疗GBM的CAR T候选靶点已被用于评估安全性和可行性，如IL-13受体亚单位α2(IL13Rα2)、人表皮生长因子受体2(HER2)和表皮生长因子受体变异体III(EGFRvIII)，它们已初步显示出令人鼓舞的抗肿瘤效果。生促红素人肝细胞受体2(EphA2)是Eph酪氨酸激酶受体之一，在多种发育、生理、免疫以及疾病过程中发挥重要作用。最近的研究表明，EphA2的过表达与多种肿瘤的预后不良有关，如食管癌、卵巢癌和肺癌。EphA2在GBM中高表达，但在正常脑中低表达，这使得EphA2成为开发新的治疗策略的一个有吸引力的靶点。

同时，由于CAR-T疗法在实体瘤治疗研究中表现出的疗效的不确定性，本领域也需要在一定程度上预测CAR-T抗肿瘤活性的方法或工具。

发明概述

本发明针对不同的EphA2表位产生了两种第三代CAR,不同的CAR转导的T细胞表现出不同的GBM抑制效应。利用高通量RNA测序揭示其分子机制，并获得用于预测CAR T细胞抗肿瘤效果的基因表达模式列表。

因此，在一些方面，本发明涉及结合EphA2的嵌合抗原受体，以及包含其的T细胞。

在一些方面本发明还涉及编码所述嵌合抗原受体的核酸、包含其的表达载体、病毒和T细胞。

本发明还涉及包含嵌合抗原受体的T细胞的用途，用于治疗肿瘤。

本发明还涉及预测CAR T细胞抗肿瘤效果的基因标志物，以及相应的预测方法和试剂盒。