[发明专利]测定TIGIT抗体的生物学活性的方法

权利要求书

1.一种测定TIGIT抗体的生物学活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

体外构建表达TIGIT的NK细胞作为效应细胞；

将不同浓度的TIGIT抗体分别与所述效应细胞和标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞共培养6h～24h，其中，所述效应细胞与所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的数量之比为(0.2～1.5)：1；

采用可与所述第一荧光标记物区别的第二荧光标记物对共培养结束后的细胞进行标记；其中，所述第一荧光标记物为细胞增殖检测用荧光标记物，所述第二荧光标记物特异性标记发生凋亡的细胞；

根据标记结果计算在不同浓度的TIGIT抗体作用下所述效应细胞对所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的杀伤率，并根据TIGIT抗体浓度与其对应的杀伤率拟合曲线来确定所述TIGIT抗体的生物学活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述根据标记结果计算在不同浓度的TIGIT抗体作用下所述效应细胞对所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的杀伤率的步骤包括：

采用流式细胞仪统计在不同浓度的TIGIT抗体作用下的所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的数量和标记有所述第一荧光标记物和所述第二荧光标记物的肿瘤细胞的数量；及

计算在不同浓度的TIGIT抗体作用下所述效应细胞对所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的杀伤率，其中，所述杀伤率为所述标记有所述第一荧光标记物和所述第二荧光标记物的肿瘤细胞的数量与所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的比值。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肿瘤细胞为骨肉瘤细胞系U2OS。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述效应细胞与所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的数量之比为(1～1.5)：1；所述共培养的时间为12h～24h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述效应细胞与所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的数量之比为1.5：1，所述共培养的时间为12h；

或，所述效应细胞与所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的数量之比为1：1，所述共培养的时间为16h；

或，所述效应细胞与所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的数量之比为1：2，所述共培养的时间为8h或24h；

或，所述效应细胞与所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的数量之比为1：5，所述共培养的时间为24h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述TIGIT抗体溶液的浓度为1×10^-6μg/mL～10μg/mL。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一荧光标记物为5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯，所述第二荧光标记物为碘化丙啶。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述共培养的体系中，所述标记有第一荧光标记物的肿瘤细胞的密度为1×10⁵个/mL～2×10⁵个/mL。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述NK细胞为NK92细胞。

10.根据权利要求1～9任一项所述的方法，其特征在于，所述体外构建表达TIGIT的NK细胞的步骤包括：

将用于表达TIGIT的核酸片段通过慢病毒转染到NK细胞中并使其表达，制备表达TIGIT的NK细胞。