[发明专利]一株具有呕吐毒素脱毒功能的产酶抑菌型枯草芽孢杆菌的筛选及应用

说明书

本发明属于农业微生物应用技术领域，具体涉及具有呕吐毒素(DON)脱毒功能的产酶抑菌型枯草芽孢杆菌的筛选及应用。呕吐毒素(DON)是污染饲料和原料的主要霉菌毒素之一，本发明筛选得到一株具有高效脱除呕吐毒素且高效抑菌、产酶的枯草芽孢杆菌GRH‑Bs007，该菌株在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M20211008，同时该菌株具有生长速度快，抗逆性能强的特点，可以用作饲用微生物添加剂。本发明菌株对呕吐毒素脱毒效果良好，能够缓解呕吐毒素(DON)对动物生产性能造成影响。

技术领域

本发明属于兽用微生物添加剂技术领域，与抗生素添加剂领域有关，本发明具体涉及一株具有呕吐毒素脱毒功能的产酶抑菌型枯草芽孢杆菌的筛选及应用。

背景技术

呕吐毒素(Deoxynivalenol，简称DON)，主要由多种镰刀菌(Fusarium)产生，因其普遍存在于饲料中，严重影响动物生产性能，受到世界各国的普遍重视(Cui et al 2013)。因此有效控制和解决饲料中霉菌毒素污染，对改善动物生产性能具有重要意义。且随着抗生素在动物生产中长期大量使用，其弊端日益突出，导致动物免疫机能低下、肠道菌群失衡，耐药菌株增加及药物残留等问题，严重危害养殖业健康发展，影响人类食品安全。因此研发新型抗生素替代品已是当务之急。

益生菌具有天然、安全、无残留、无污染等优点，具有防止动物疾病，增强动物免疫力，提高饲料利用率及动物生产性能的作用，已成为抗生素最佳替代品之一被广泛研究开发。同时研究表明益生菌及其代谢产物具有较好的脱毒效果，且具有生长迅速、繁殖快和易于培养的特点，非常易于大规模生产和推广使用，已成为极具发展潜力的霉菌毒素脱毒剂。

本发明通过筛选具有高效脱除呕吐毒素且高效抑菌、产酶的益生菌，并对其进行鉴定、生物学特性分析、脱毒效果验证，开发具有呕吐毒素脱毒功能的产酶抑菌型饲用微生物添加剂。

发明内容

为克服现有技术存在的缺陷，本发明提供了一种具有呕吐毒素脱毒功能的产酶抑菌型枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，以及该菌株在呕吐毒素脱毒中的应用。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明首先在实验室现有的从动物肠道中分离、纯化、保存的212株益生菌菌库中，选用DON类似物环氧乙烷作为唯一碳源初筛培养，筛选获得8株优势菌株。然后再对初筛获得的8株菌株用DON纯品作为唯一碳源进行脱毒复筛试验，结合抑菌试验及产酶试验综合评价，筛选具有筛选出具有高效脱除呕吐毒素且高效抑菌、产酶的益生菌菌株GRH-Bs007。通过形态学特征、生理生化指标、16S rRNA gene扩增测序比对，确定菌株GRH-Bs007为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)，其16S rRNA基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，该枯草芽孢杆菌在2021年8月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：湖北省武汉市武汉大学内)，其提议的分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GRH-Bs007，保藏编号为CCTCC NO：M20211008。

经测定，具有呕吐毒素脱毒功能的产酶抑菌型枯草芽孢杆菌GRH-Bs007对呕吐毒素有很好的脱毒能力，脱毒24小时，可脱除84.45％的呕吐毒素；对大肠杆菌K88、O157、O139、O157、沙门氏菌金黄色葡萄球菌均有良好的抑菌活性；具有良好的产淀粉酶的能力(酶活64.6U/mL)，且生长速度稳定，2h左右进入对数生长期，对数期为4h左右，芽胞体对温度、胃酸、胆盐有着较高的耐受性。

本发明通过对DON较为敏感的动物模型验证枯草芽胞杆菌GRH-Bs007对灌胃 DON的BALB/c小鼠的具有良好的解毒作用。

本发明通过体内、体外试验分别验证了枯草芽孢杆菌GRH-Bs007对DON的优良脱毒效果，且本发明的枯草芽孢杆菌菌具有良好的抑菌效果、产淀粉酶活性及抗逆性，可以作为饲料添加剂使用。

本发明的有益效果：