[发明专利]一种用于己烯雌酚检测的上转换发光柔性生物传感器的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种用于己烯雌酚检测的上转换发光柔性生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

步骤一，制备油酸包覆上转换纳米材料：将六水氯化钇、六水氯化镱和六水氯化铥按比例称取后分散在甲醇溶剂A中，加入油酸和1-十八烯后，于一定温度条件下进行第一次搅拌，搅拌后冷却至室温，逐滴加入氢氧化钠、氟化铵和甲醇溶剂B的混合溶液，密封后加热一段时间，加热后进行第二次搅拌，于搅拌后冷却至室温，经离心分离得到上转换纳米粒子沉淀，并用环己烷和乙醇混合溶液清洗，干燥后得到纯净的油酸包覆上转换纳米粒子；

步骤二，制备氨基化上转换纳米材料：称取步骤一制备的油酸包覆的上转换纳米粒子分散于盐酸溶液中超声处理；处理结束后，再加入乙醇并超声分散均匀，随后加入去离子水、氨水于一定温度条件下搅拌均匀；搅拌均匀后加入正硅酸四乙酯进行第一次反应，再加入3-氨丙基三乙氧基硅烷进行第二次反应；反应结束后离心分离，得到的产物再用蒸馏水清洗，得到氨基化上转换纳米材料；

步骤三，制备柔性上转换发光传感器：根据需求裁取聚二甲基硅氧烷薄膜，使用过氧化氢溶液和浓硫酸混合溶液浸泡处理后，取出聚二甲基硅氧烷薄膜用蒸馏水洗净后再浸入3-氨丙基三乙氧基硅烷水溶液中加热反应，反应结束后氮气吹干，得到氨基功能化的聚二甲基硅氧烷薄膜；

将步骤二制备的上转换纳米粒子用戊二醛水溶液活化；分离出活化后的上转换纳米粒子分散在磷酸盐缓冲液中，并将氨基功能化的聚二甲基硅氧烷薄膜浸入所述缓冲液中孵育，制备得到柔性上转换发光传感器；

步骤四，制备生物功能化的柔性上转换发光传感器：将步骤三得到的柔性上转换发光传感器浸入戊二醛水溶液中进行活化；反应结束后取出柔性上转换发光传感器使用蒸馏水清洗柔性上转换发光传感器，并将柔性上转换发光传感器浸入磷酸盐缓冲液中，然后加入己烯雌酚适配体互补序列溶液，于摇床进行第一次恒温孵育；孵育结束后，再加入4-((4-(二甲氨基)苯基)偶氮)苯甲酸标记的己烯雌酚适配体溶液，于摇床进行第二次恒温孵育；反应结束后取出传感器，去离子水清洗，氮气吹干，制备得到生物功能化的柔性上转换发光传感器。

2. 根据权利要求1所述的用于己烯雌酚检测的上转换发光柔性生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤一中所述六水氯化钇、六水氯化镱、六水氯化铥和甲醇溶剂A的用量比为0.2412 g：0.0775 g：0.0019 g：10 mL；所述甲醇溶剂A、油酸、1-十八烯的用量比为10mL：6 mL：15 mL；所述甲醇溶剂A、氢氧化钠、氟化铵和甲醇溶剂B的用量比为10 mL：0.1 g：0.1482 g：10 mL。

3. 根据权利要求1所述的用于己烯雌酚检测的上转换发光柔性生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤一中所述一定温度为160 ℃；所述第一次搅拌为磁力搅拌，时间为30min；所述密封后加热的温度为50-80 ℃，加热时间为40 min；所述第二次搅拌的温度为300℃，搅拌时间为1 h。

4. 根据权利要求1所述的用于己烯雌酚检测的上转换发光柔性生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述上转换纳米粒子、盐酸溶液、乙醇、氨水、正硅酸四乙酯、3-氨丙基三乙氧基硅烷比例为20 mg: 0.5 mL: 60 mL: 2.5 mL : 20 uL : 50 uL；所述第一次反应时间为4-6 h，所述第二次反应时间为1-2 h；所述盐酸溶液的浓度为0.1 mol/L；所述一定温度条件为65 ℃。

5. 根据权利要求1所述的用于己烯雌酚检测的上转换发光柔性生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤三中，所述聚二甲基硅氧烷薄膜的尺寸为1×1×0.05 cm；所述过氧化氢溶液和浓硫酸混合溶液体积比为1:3，浸泡处理时间为60 s；所述3-氨丙基三乙氧基硅烷溶液的体积分数为5%，加热反应的温度为60-70 ℃，反应时间为3 h；所述过氧化氢溶液的质量分数是30%，所述浓硫酸质量分数是98%。