[发明专利]苏氨酸醛缩酶的突变体及其在制备取代苯丝氨酸衍生物中的应用

权利要求书

1.苏氨酸醛缩酶的突变体，其特征在于，所述苏氨酸醛缩酶来源于新月柄杆菌（Caulobacter crescentus），其氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示，其中所述苏氨酸醛缩酶的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：89，SEQ ID NO：36所示。

2.权利要求1所述苏氨酸醛缩酶的突变体的编码基因。

3.权利要求2所述编码基因构建的重组载体。

4.权利要求3所述重组载体转化获得的重组基因工程菌。

5.权利要求1所述苏氨酸醛缩酶的突变体在制备2-/3-/4-位取代的苯丝氨酸衍生物中的应用。

6.权利要求5所述的应用，其特征在于，以苏氨酸醛缩酶的突变体为催化剂，以2-/3-/4-位取代的苯甲醛为底物，以5-磷酸吡哆醛为辅酶，以甘氨酸/甘氨酸酯为辅底物，控制温度和搅拌速度的条件下，在反应介质里进行酶催化，反应结束后，分离纯化，获得2-/3-/4-位取代的苯丝氨酸衍生物。

7.权利要求6所述的应用，其特征在于，所述底物为下列之一：苯甲醛，2-氯苯甲醛，2-氟苯甲醛，2-溴苯甲醛，2-硝基苯甲醛，2-甲砜基苯甲醛，2-羟基苯甲醛，3-氯苯甲醛，3-氟苯甲醛，3-溴苯甲醛，3-硝基苯甲醛，3-甲砜基苯甲醛，3-羟基苯甲醛，4-氯苯甲醛，4-氟苯甲醛，4-溴苯甲醛，4-硝基苯甲醛，4-甲砜基苯甲醛，4-羟基苯甲醛；所述辅底物为下列之一：L-甘氨酸，L-甘氨酸盐酸盐，L-甘氨酸甲酯盐酸盐，L-甘氨酸乙酯盐酸盐，N-Boc-L-甘氨酸，N-Boc-L-甘氨酸乙酯，N-Z-L-甘氨酸，N-Z-L-甘氨酸乙酯，N-Z-L-甘氨酸甲酯；反应介质为下列之一：pH 8-9的磷酸缓冲体系，水-乙醇体系，水-甲醇体系，甲醇体系，乙醇体系。

8.权利要求6所述的应用，其特征在于，酶的用量为50-1000 mg/L，底物浓度为1-100g/L，甘氨酸/甘氨酸酯浓度为5-200 g/L，5-磷酸吡哆醛浓度为0.01-0.2 g/L，控制温度在25-45℃，搅拌速度70-300 rpm。