[发明专利]煮沸法提基因组DNA在浸矿菌中的应用

说明书

本发明提供一种煮沸法提基因组DNA在浸矿菌中的应用，涉及浸矿菌基因提取领域。该煮沸法提基因组DNA在浸矿菌中的应用，包括以下步骤：步骤一、对浸矿菌进行培养；步骤二、对浸矿菌进行收集；步骤三、清洗；步骤四、进行煮沸处理；步骤六、进行测定。通过合理的提取步骤，使步骤简化，节约提取的时间，提取迅速，且成本消耗低，通过煮沸水浴裂解，可以有效使内部的DNA提取率较高，使得其可以确保低丰度的微生物被检测到，得到的DNA较为灵敏、保真，整个提取步骤在一个试管中完成，可以有效避免在转移的过程中被污染，提高了内部的纯度，同时减少了操作上的失误。

技术领域

本发明涉及浸矿菌基因提取技术领域，具体为一种煮沸法提基因组DNA 在浸矿菌中的应用。

背景技术

微生物冶金中涉及到的大多数浸矿微生物都是一些极端环境下生长的化能自养菌，包括细菌和古生菌，相对于其他环境下的微生物具有生长速度慢，菌体浓度普遍较低的特点。在研究这些低丰度的微生物分子生物学特征时，需收集大量样品以满足DNA提取的需要，且在提取的过程中易受到浸出体系中的pH、离子浓度、矿渣等干扰，使DNA提取也变得困难。

DNA提取方法有很多，但是没有哪一种方法是被定为科学界的标准，每种方法都有它的优缺点。目前，环境样品的DNA提取可分为直接提取法、间接提取法及他们的改进，直接提取法可得到高回收率的DNA，但其纯度较低，会影响到后续的PCR扩增和使群落分析失真；间接提取法可得到较高纯度的DNA 和保真DNA的多样性，但这种方法只适用于细菌[75]。实验室常采用的细菌 DNA提取方法有碱裂解法、SDS裂解法、Chelex-100法、CTAB法、液氮研磨法等，但这些常规提取细菌DNA的方法往往只能针对革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌中的一类，缺乏通用性。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种煮沸法提基因组DNA在浸矿菌中的应用，解决了现有对浸矿菌DNA提取中纯度不高且缺乏通用性的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种煮沸法提基因组DNA在浸矿菌中的应用，包括以下步骤：

步骤一、对浸矿菌进行培养：通过利用9K培养基加入相应的培养物质，然后通过稀硫酸调节PH值，121℃灭菌20分钟，将浸矿菌放入培养基中，在合适的温度下进行培养；

步骤二、对浸矿菌进行收集：当浸矿菌涨到对数期时，收集菌液，在 12000r/min的条件下离心3分钟，收集菌体，进行洗涤，然后用无菌水悬浮各菌液，以血球计数板计数，选取两份，每份含菌量为10⁸个；

步骤三、清洗：取得到的浸矿菌，加入到1，5mL的离心管中，进行离心，然后吸取上清液；

步骤四、进行煮沸处理：向步骤三中的细胞中加入60μLTE缓冲液，将细胞悬浮起来，在100℃的沸水中水浴2分钟；

步骤五、进行提取DNA：将水浴后的细胞液在13000r/min高速下离心1 分钟，提取上清液，在零下20℃保存备用；

步骤六、进行测定：对内部浓度、PCR扩增、灵敏度进行测定。

优选的，所述步骤1中的浸矿菌包括嗜酸氧化亚铁硫杆菌、嗜酸氧化硫硫杆菌、嗜铁钩端螺旋菌、喜温硫杆菌、嗜热硫氧化硫化杆菌、嗜热嗜酸铁质菌。

优选的，所述9K培养基包括：(NH4)₂SO₄3g/L，KCl0.1g/L，K₂HPO₄0.5g， MgSO₄·7H₂O0.5g/L，Ca(NO₃)₂0.01g/L。