[发明专利]一种冠状病毒致弱突变株及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种冠状病毒致弱突变株，其特征在于，所述冠状病毒致弱突变株是发生了冠状病毒3'末端非翻译区(3'-UTR)高变区(HVR)的核苷酸缺失。

2.根据权利要求1所述的突变株，其特征在于，与GenBank登录号MT072864的穿山甲冠状病毒GX/P2V的基因序列相比，所述冠状病毒致弱突变株的3'末端非翻译区(3'-UTR)的高变区(HVR)缺失了104个核苷酸，缺失范围位于MT072864的第29,617至29,720位核苷酸。

3.根据权利要求2所述的突变株，其特征在于，与GenBank登录号MT072864的穿山甲冠状病毒GX/P2V的基因序列相比，所述冠状病毒致弱突变株还包含单核苷酸突变，导致核蛋白的最后一位氨基酸Ala变为Val。

4.根据权利要求3所述的突变株，其特征在于，所述冠状病毒致弱突变株的全基因组核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

5.根据权利要求4所述的突变株，其特征在于，所述冠状病毒致弱突变株为GX_P2V分离株，于2021年7月23日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.23082。

6.一种冠状病毒的减毒方法，其特征在于，包括以下步骤：使冠状病毒基因组3'末端非翻译区(3'-UTR)的高变区(HVR)核苷酸缺失；优选地，与GenBank登录号MT072864的穿山甲冠状病毒GX/P2V的基因组3'末端非翻译区(3'-UTR)的高变区(HVR)相比，有104个核苷酸缺失。

7.根据权利要求6所述的冠状病毒的减毒方法，其特征在于，还包括以下步骤：使核蛋白最后一位氨基酸Ala置换为Val。

8.权利要求1-5任一项所述的冠状病毒致弱突变株或者通过权利要求6或7所述的减毒方法获得的冠状病毒致弱突变株的应用，其特征在于，包括以下任一种：

(1)抗冠状病毒活性药物的筛选与评价；

(2)抗冠状病毒疫苗的筛选与评价；

(3)抗冠状病毒减毒疫苗或灭活疫苗的制备；所述疫苗中还包括药学上可接受的佐剂；

(4)冠状病毒诊断和治疗性抗体的制备。

9.一种用于筛选和/或评价抗冠状病毒活性药物的药物筛选模型，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述的冠状病毒致弱突变株或者通过权利要求6或7所述的减毒方法获得的冠状病毒致弱突变株；

优选地，所述药物筛选模型为穿山甲冠状病毒GX_P2V分离株感染的哺乳动物细胞；进一步优选Vero细胞；

优选地，所述药物筛选模型为穿山甲冠状病毒GX_P2V分离株感染的哺乳动物；进一步优选叙利亚金黄仓鼠；

更进一步优选地，所述药物筛选模型用于筛选和/或评价抗SARS-CoV-2病毒活性的药物。

10.一种筛选和/或评价抗冠状病毒活性药物的方法，其特征在于，采用权利要求9所述的药物筛选模型进行，包括如下步骤：

步骤(1)：向所述药物筛选模型中加入待测试的药物并进行培养；

在步骤(1)之后还任选地包括以下步骤(2a)或步骤(2b)，或同时包含步骤(2a)和步骤(2b)：

步骤(2a)：在显微镜下观察细胞病变，

步骤(2b)：测定细胞和上清中的病毒核酸；

优选地，步骤(1)中的培养时间为12-90小时；进一步优选地，为24-72小时，48-72小时；具体为，24小时，48小时或72小时；

进一步优选地，所述冠状病毒为SARS-CoV-2病毒。