[发明专利]一种利用微生物转化烟酰胺为烟酸的方法

权利要求书

1.一种利用微生物转化烟酰胺为烟酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S100：紫外诱变筛选高表达烟酰胺菌株；

S200：高效烟酰胺菌训化；

S300：将驯化后的菌株接入常规微生物液体培养基培养至对数期，离心收集菌体，用生理盐水重悬，在200-500g/L浓度的烟酰胺溶液中加，每100mL溶液中加入0.5-5U酶量的菌悬液，反应在pH6.0-8.0、温度18-40℃条件下进行2-8h，结束后，烟酰胺含量低于30mg/L。

2.如权利要求1所述的一种利用微生物转化烟酰胺为烟酸的方法，其特征在于，S100的步骤如下：

S101：取对数生长期的大肠杆菌M110020，平铺于90mm的无菌培养皿，置于15w紫外灯下25cm处，分别在避光条件下照射处理15s、30s、60s、75s、90s、120s，150s；

S102：照射后的培养皿放置在冰水中，静置1.5小时，将培养的菌液均匀涂布在筛选培养基上，30℃静置培养4天；生长的单菌落用于发酵摇瓶筛选，20℃-35℃摇床培养，摇床转速150-300rpm；

S103：挑取若干单菌落，接种于筛选培养基；

S104：高效烟酰胺菌通过HPLC检测筛选获得，并用于后续训化。

3.如权利要求2所述的一种利用微生物转化烟酰胺为烟酸的方法，其特征在于，S103的筛选培养基配方如下：葡萄糖：0.1-30(g/L)、酵母浸粉0.1-1(g/L)、蛋白胨0.1-1(g/L)、烟酰胺5-50(g/L)、KH₂PO₄ 0.5-1.5(g/L)、K₂HPO₄ 0.5-1.5(g/L)、MgSO₄·7H₂O 0.1-1(g/L)、NaCl 1(g/L)、(NH₄)₂SO₄1-5(g/L)。

4.如权利要求1所述的一种利用微生物转化烟酰胺为烟酸的方法，其特征在于，S200的步骤如下：

S201：首先配制一系列液体培养基(编号1,2,3}…):按编号由小到大的顺序，培养基中筛选时用的营养比例逐渐减小，烟酰胺的物质比例在逐渐增大，121℃，高温灭菌200-30min；

S202：将高效烟酰胺菌分别接种到1号培养基中，在摇床中进行培养，待培养基中OD600大于0.5时，吸取一定量的1号培养基中的菌液至2号培养基中，依次类推，直至将菌液接种至烟酰胺含量为200-500g/L培养基中进行培养，以此实现从富营养到贫营养的驯化；

S203：接下来再配制一系列液体培养基(编号1,2,3}…):按照编号由小到大的顺序，培养基中筛选时用的营养比例在逐渐增大，烟酰胺比例在逐渐减小，将这些培养基121℃，高温灭菌200-30min，待用。然后，从高含量烟酰胺的培养基中吸取一定量菌液至1号培养基中，操作同上，实现从贫营养到富营养的驯化；

S204：反复几次富营养到贫营养，贫营养到富营养的驯化，最后的菌液也用于实际烟酰胺转化中，并要将驯化后的烟酰胺菌保存。

5.如权利要求4所述的一种利用微生物转化烟酰胺为烟酸的方法，其特征在于，所述富营养培养基组成为：KH₂PO₄ 0.5-1.5(g/L)、K₂HPO₄ 0.5-1.5(g/L)、MgSO₄·7H₂O 0.1-1(g/L)、NaCl 1-10(g/L)、胰蛋白胨5-10(g/L)、酵母粉5-15(g/L)、氯化铵0.1-1(g/L)、甘油0.1-1(g/L)，其余为水，pH6.5-7.5。

6.如权利要求1所述的一种利用微生物转化烟酰胺为烟酸的方法，其特征在于，S300的常规微生物液体培养基为LB液体培养基、NA液体培养基或PDA液体培养基。