[发明专利]一类靶向PD-L1的超高亲和力小蛋白及用途

权利要求书

1.一种靶向PD-L1的小蛋白，其特征是，所述小蛋白能特异性靶向结合PD-L1，表现出超强的亲和力，并且能够与野生型PD-1竞争性结合PD-L1，有效阻断PD-1与PD-L1的结合；

其中，所述的小蛋白有一条肽链构成，主要形成三个α-螺旋二级结构；

并且，所述的小蛋白其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白包括串联在一起的两个或多个权利要求1所述的靶向PD-L1的小蛋白。

3.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括第一多肽和/或第二多肽；

其中，所述第一多肽从N端到C端具有如式I所示的结构，所述第二多肽从N端到C端具有如式II所示的结构，

S-Mx-H-Fc(式I)

S-Fc-H-Mx(式II)

其中，

S为无或信号肽序列；

M为PD-L1结合区或结合元件，所述PD-L1结合区的氨基酸序列来自如权利要求1所述的靶向PD-L1的小蛋白的氨基酸序列，并且所述M的氨基酸序列如SEQ IDNo:1所示；

H为铰链区；

Fc为无或免疫球蛋白的恒定区，或其片段；

“-”表示连接上述元件的肽键或连接肽；

x为1-4的正整数。

4.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述S的氨基酸序列如SEQ IDNO:21所示。

5.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述x为2个。

6.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述H的氨基酸序列如SEQ IDNO:9所示。

7.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示。

8.如权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述第一多肽的氨基酸序列如SEQ IDNO:13所示。

9.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的靶向PD-L1的小蛋白、权利要求2所述的重组蛋白、或如权利要求3所述的融合蛋白。

10.如权利要求9所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO:2或14所示。

11.一种载体，其特征在于，所述载体中含有如权利要求9所述的多核苷酸。

12.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞中含有如权利要求11所述的载体，或基因组中整合有如权利要求9所述的多核苷酸。

13.一种免疫偶联物，其特征在于，该免疫偶联物含有：

(a)如权利要求1所述的靶向PD-L1的小蛋白、如权利要求2所述的重组蛋白、或如权利要求3所述的融合蛋白；和

(b)选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、或酶。

14.一种药物组合物，其特征在于，包括：

(a)如权利要求1所述的靶向PD-L1的小蛋白、或权利要求2所述的重组蛋白、或如权利要求3所述的融合蛋白，或其编码基因；或如权利要求13所述的免疫偶联物；和

(b)药学上可接受的载体。

15.一种制备如权利要求1所述的靶向PD-L1的小蛋白、或权利要求2所述的重组蛋白或如权利要求3所述的融合蛋白的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)在合适的条件下，培养如权利要求12所述的宿主细胞，从而获得含所述小蛋白或重组蛋白或融合蛋白的培养物；和

(b)对步骤(a)中得到的培养物进行纯化和/或分离，获得所述的靶向PD-L1的小蛋白或重组蛋白或融合蛋白。

16.如权利要求1所述的靶向PD-L1的小蛋白或如权利要求3所述的融合蛋白、或权利要求13所述的免疫偶联物的用途，其特征在于，用于制备药剂、试剂、检测板或试剂盒；其中，所述试剂、检测板或试剂盒用于：检测样品中的PD-L1；其中，所述药剂用于治疗或预防表达PD-L1的肿瘤。