[发明专利]一种基于磁性纳米颗粒的荧光差分快速检测方法

权利要求书

1.一种基于磁性纳米颗粒的荧光差分快速检测方法，其特征在于，步骤如下：1）利用双溶剂法和表面修饰制备具有单分散性和稳定性的锰铁氧体磁性纳米颗粒（MNP）；2）修饰后的MNP用于共价或者非共价结合配体Ａ，得到MNP－配体Ａ复合物，所述的配体Ａ可特异性的结合目标物；3）制备荧光标记的配体Ｂ，荧光标记的配体Ｂ可特异性的结合目标物，将荧光标记的配体Ｂ与MNP－配体Ａ复合物、目标物处在同一反应体系时，形成MNP－配体Ａ－目标物－荧光标记的配体Ｂ三聚复合物；4）施加磁场移除三聚复合物，用特定波长的光来激发荧光，检测反应体系中移除三聚复合物前后的荧光强度，利用其荧光强度差值来单调标定目标物浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）在所述的MNP进行表面修饰，采用聚阳离子化合物聚乙烯亚胺来改变表面的电荷性质并增大zeta绝对值，使其表面带有一层正电荷保证颗粒在液相体系中的单分散性，避免团聚。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用磁性纳米粒子固有的与磁铁相吸的属性，将其作为载体直接在复杂环境中捕获目标物，通过外加磁场实现目标物分离。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）中，所述的配体Ａ包括抗原、抗体或者核酸；步骤３）中，所述的配体Ｂ包括抗原、抗体或者核酸；所述的荧光标记包括FITC、Cy系列、 Alexa Flour 系列、eFlour系列、Eu 系列，或者量子点。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在病毒目标物浓度较高时，激发光单次入射，分别检测加入病毒目标物前后的荧光强度并作荧光差值，表征病毒目标物浓度；当病毒目标物浓度较低时，通过外加一对高反镜形成FP腔的腔增强装置来进一步提高检测病毒抗体的灵敏度，此时入射的激发光在高反腔内多次反射增加光程进而增强激发荧光强度，提高检测病毒目标物的检测限。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，运用荧光差值法来表征目标物的浓度，消除多余的荧光标记配体Ｂ对荧光检测的贡献；选择蓝绿光作为入射激发光，降低水对入射光的吸收对检测结果的影响。