[发明专利]一种促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法

权利要求书

1.一种促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法，其特征在于所述方法为：

(1)构建ALX1基因的表达载体，并将所述ALX1基因的表达载体转入所述间充质干细胞中，得到高效表达外源ALX1的间充质干细胞；

(2)取步骤(1)制备的所述的高效表达外源ALX1的间充质干细胞用成骨细胞诱导液进行定向诱导培养，得到所述成骨细胞。

2.如权利要求1所述的促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法，其特征在于所述间充质干细胞来自下列组织之一：骨髓、脂肪、新生儿脐带、胎盘。

3.如权利要求2所述的促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法，其特征在于：所述的间充质干细胞为人骨髓间充质干细胞。

4.如权利要求1所述的促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法，其特征在于：所述ALX1基因的表达载体是通过将ALX1基因连接到慢病毒过表达载体上构建而成。

5.如权利要求4所述的促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法，其特征在于所述ALX1基因的表达载体按如下方法制备：通过引物CGC GTC GAC ATG GAG TTT CTG AGC GAGA和CAT GGC CCA TGA AAT ATT GGC TAG CTA GC对人ALX1基因的cDNA序列进行PCR扩增，得到目的基因，用限制性内切酶SalI和NheI分别对慢病毒过表达载体Plenti-CMV-Puro和所述目的基因进行酶切，得到带粘性末端的目的基因和线性载体，用连接酶将所述带粘性末端的目的基因和线性载体进行连接，得到所述ALX1基因的表达载体。

6.如权利要求5所述的促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法，其特征在于所述人ALX1基因的cDNA序列采用如下方法获得：采用Trizol试剂分离提取人骨髓间充质干细胞总RNA，然后采用cDNA第一链合成试剂盒进行cDNA第一链合成，即获得所述人ALX1基因的cDNA序列。

7.如权利要求1所述的促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法，其特征在于：所述ALX1基因的表达载体通过Lip8000转导试剂盒转入所述间充质干细胞中。

8.如权利要求7所述的促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法，其特征在于所述高效表达外源ALX1的间充质干细胞按如下方法得到：所述ALX1基因的表达载体通过慢病毒包装质粒psPAX2和PMD2G转染293T细胞进行病毒包装后，在8μg/mL的1,5-二甲基-1,5-二氮十一亚甲基聚甲溴化物辅助下对间充质干细胞继续培养12个小时，即获得所述的高效表达外源ALX1的间充质干细胞。

9.如权利要求1所述的促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法，其特征在于每升所述成骨细胞诱导液由以下组分组成：900mLDMEM-LG培养液，100mL胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素、10mMβ-甘油磷酸钠、50μM抗坏血酸。

10.如权利要求1所述的促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法，其特征在于所述定向诱导培养的条件为：37℃，7天。