[发明专利]一种生物体内纳米污染物的成像检测方法

权利要求书

1.一种生物体内纳米污染物的成像检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在纳米颗粒表面先包裹拉曼活性分子，再包裹待检测的纳米污染物，获得核壳结构纳米污染物；

将所述核壳结构纳米污染物加入到生物培养液中，进行培养，使生物体内摄入核壳结构纳米污染物；培养结束后，将受污染生物取出并固定在载玻片上，得到预处理样品；

(2)用激光显微拉曼光谱仪对所述预处理样品进行拉曼检测与成像，得到预处理样品的拉曼光谱；然后根据所述拉曼活性分子的特征峰，对所述拉曼光谱通过成像软件进行处理，得到纳米污染物的拉曼成像图，即可获得纳米污染物在生物体内的空间分布。

2.根据权利要求1所述的成像检测方法，其特征在于：所述纳米颗粒为金纳米颗粒或银纳米颗粒。

3.根据权利要求1所述的成像检测方法，其特征在于：所述拉曼活性分子为结晶紫、罗丹明6G、DTTC、DTDC、IR-775氯化物、对硝基苯硫酚、对氨基苯硫酚和对苯二硫酚中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的成像检测方法，其特征在于：所述纳米污染物为Ag、SiO₂、TiO₂、MnO₂和纳米塑料中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的成像检测方法，其特征在于：所述生物为植物、微生物或动物。

6.根据权利要求1所述的成像检测方法，其特征在于：所述核壳结构纳米污染物的制备方法为：

步骤1、将待检测纳米污染物的前驱体溶解在溶剂中，获得前驱体溶液；

步骤2、将纳米颗粒分散在含表面稳定剂的溶剂中，获得纳米颗粒分散液；然后再加入拉曼活性分子分散液，25-50℃搅拌20min-2h，离心、洗涤，加含表面稳定剂的溶剂重悬至原始体积，获得纳米颗粒/拉曼活性分子分散液；

步骤3、在所述纳米颗粒/拉曼活性分子分散液中加入所述前驱体溶液，水热反应，离心、洗涤、用水分散，即获得核壳结构纳米污染物。

7.根据权利要求6所述的成像检测方法，其特征在于：

所述前驱体溶液的浓度为5-50mM；

所述溶剂为乙醇和水中的至少一种；

所述表面稳定剂为十六烷基三甲基氯化铵、聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基磺酸钠、3-氨基丙基三乙氧基硅烷和3-巯丙基三甲氧基硅烷中的至少一种；

所述含表面稳定剂的溶剂中表面稳定剂浓度为25-50mM；

所述纳米颗粒分散液中纳米颗粒的浓度为1-10nM；

所述拉曼活性分子分散液的浓度为0.1-1mM，所用溶剂为乙醇、DMSO和DMF中的至少一种；

所述纳米颗粒分散液与所述拉曼活性分子分散液的体积比为10～100:1；

所述纳米颗粒/拉曼活性分子分散液与所述前驱体溶液的体积比为10～100:1。

8.根据权利要求1所述的成像检测方法，其特征在于，所述固定的方法为：将受污染生物取出并转移在载玻片上，滴上固定液，4～25℃固定10～60min；

所述固定液是由丙三醇或1,2-丙二醇与水按照质量比1:0～4混合而成。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤2)中所述拉曼检测的条件为：

采用633nm或785nm激光，激光能量为10-100％；

光栅为600lines/mm或1800lines/mm；

空间分辨率为1-50μm/pixel，单像素点采集时间为0.001～1s；

光谱采集范围为500～2000cm-¹。