[发明专利]一种可缓解酒精性肝损伤的干腌火腿源多肽及其制备方法

权利要求书

1.一种可缓解酒精性肝损伤的干腌火腿源多肽的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：

步骤1：将干腌火腿的股二头肌与磷酸盐缓冲液混合，然后于冰浴条件下用匀浆机进行均质，接着离心取上清，得到干腌火腿多肽提取物；

步骤2：对干腌火腿多肽提取物进行超滤，再用凝胶柱分离，洗脱条件为：洗脱液为0.01mol/L的HCl，恒温分离，流速0.8mL/min，用280nm紫外检测器测定馏分，用自动馏分收集器收集每管馏分；馏分在真空冷冻干燥机中干燥；

步骤3：采用液相分离将步骤2得到的缓解酒精性肝损伤最有效的组分进一步分离，获得最具缓解酒精性肝损伤活性的多肽；

步骤4：采用质谱对液相分离得到的最具缓解酒精性肝损伤活性的多肽进行分析，鉴定活性肽的结构，得到一种保护肝活性的肽序列为：Lys-Arg-Gln-Lys-Tyr-Asp。

2.根据权利要求1所述的可缓解酒精性肝损伤的干腌火腿源多肽的制备方法，其特征在于：步骤3包括将冻干后的样品溶于1mL蒸馏水，注入HPLC系统，采用BEH C18色谱柱进行梯度洗脱，流速为0.3 mL/min，洗脱液A为0.1%甲酸，洗脱液B为100%乙腈；流速梯度为：0-10min，100% A，10-22 min，30-80% B；22-23 min，100% A；肽峰在280 nm紫外波长下检测；将多肽对应的峰分为七个部分，冷冻干燥；收集七个干腌火腿小肽分离组分，干燥后测定各个小肽的缓解酒精性肝损伤的活性。

3.根据权利要求1所述的可缓解酒精性肝损伤的干腌火腿源多肽的制备方法，其特征在于：鉴定方法包括：采用Acquity高效液相色谱系统，采用反相BEH C18色谱柱对最具缓解酒精性肝损伤活性的多肽峰进行分离；梯度洗脱：流速0.3mL/min，洗脱液a为0.1%甲酸，洗脱液b为100% CAN；流动梯度为:0-10 min，100%a，10-22min，30-80% b；22-23 min，100% a；柱温保持在25℃；流量直接进入MS/MS系统进行多反应测量；前体离子记录的质量范围为m/z=200-4000；使用Mass Lynx V4.1操作仪器，分析质谱图信息。