[发明专利]SERS生物传感器及其在制备用于检测心梗miRNA的检测体系中的应用

权利要求书

1.SERS生物传感器，采用下述方法制备得到：(1)将发卡探针DNA修饰在Fe₃O₄的表面；(2)加MCH防止非特异性结合；(3)加入miRNA、辅链DA、辅链DB产生酶切产物；(4)预先将发夹DNA 1、发夹DNA 2修饰在AuNP的表面；(5)将发夹DNA 1、发夹DNA 2修饰的AuNP加入经步骤(3)孵育好的Fe₃O₄进行杂化链式扩增反应，反应过夜，离心洗涤。

2.如权利要求1所述的SERS生物传感器，其特征在于，步骤(1)Fe₃O₄预先进行活化：取0.1-0.3mg/mL的Fe₃O₄，加入EDC和NHS振摇过夜。

3.如权利要求1所述的SERS生物传感器，其特征在于，步骤(1)是将发卡探针和Fe₃O₄添加到pH为7.0-7.5的PBS缓冲液中孵育，借助磁铁用H₂O洗涤一次，再溶于PBS缓冲液中。

4.如权利要求1所述的SERS生物传感器，其特征在于，步骤(3)加Mg²⁺孵育过夜。

5.如权利要求1所述的SERS生物传感器，其特征在于，采用下述方法制备得到：

(1)取500μL、0.2mg/mL的Fe₃O₄，加入10mM EDC 5μL,1mM NHS 5μL，振摇过夜；

(2)再将发卡探针DNA和上述活化的Fe₃O₄添加到1mL、pH为7.4的PBS缓冲液中，室温振摇孵育10h以上，借助磁铁用H₂O洗涤一次，再溶于PBS缓冲液中；

(3)取上述步骤(2)溶液加MCH孵育半小时，孵育后用PBS洗涤；

(4)将1μM辅链DA、1μM辅链DB、miRNA一起退火冷却后加入上述步骤(3)溶液中，再加10mM Mg²⁺孵育过夜；

(5)将两个发夹DNA 1、发夹DNA 2单独修饰在10-20nm的AuNP上，然后将步骤(4)溶液加入其中，再加10mM Mg²⁺孵育过夜，借助磁铁用H₂O洗涤。

6.如权利要求5所述的SERS生物传感器，其特征在于，步骤(4)孵育完成后借助磁铁用H₂O洗涤一次，再溶于PBS缓冲液中。

7.如权利要求5所述的SERS生物传感器，其特征在于，步骤(5)将两个发夹预先单独修饰在AuNP的表面，修饰好后分别加入10^-5M的拉曼染料浸染30min，再离心洗涤，分散在TAE溶液中，再分别加入MCH孵育，离心洗涤再分散在TAE溶液中。

8.权利要求1-7任一项所述SERS生物传感器在制备用于检测心梗miRNA的检测体系中的应用，其特征在于，所述miRNA包括但不限于miRNA-499、miRNA-208、miRNA-328。