[发明专利]一种克霉唑原料基因毒性杂质HPLC检测方法及方法学验证

说明书

一种克霉唑原料基因毒性杂质HPLC检测方法及方法学验证，取甲醛对照品或乙二醛对照品用稀释剂定量配制成对应阳性对照品储配液，取克霉唑原料与稀释剂或对应阳性对照品储配液、磷酸溶液、衍生溶液衍生化反应、与稀释剂配制为供试品溶液和阳性供试品溶液，注入液相色谱仪、在柱温30‑35℃、流通相为乙腈和水、流速为0.5‑1ml/min下检测、记录色谱图，按下式计算甲醛或乙二醛含量：按专属性、灵敏度、线性和范围、精密度、准确度、耐用性进行方法学验证，快速、有效的检测克霉唑原料药中潜在的基因毒杂质即甲醛和乙二醛，以便控制克霉唑原料质量。

技术领域

本发明涉及一种克霉唑原料基因毒性杂质HPLC检测方法及方法学验证，属于克霉唑原料检测技术领域。

背景技术

克霉唑为广谱抗真菌药，对多种真菌尤其是白色念珠菌具有较好抗菌作用，其作用机制是抑制真菌细胞膜的合成、以及影响其代谢过程，克霉唑原料药用于是全身性真菌感染、也外用于局部真菌感染。克霉唑的合成工艺包括：

步骤一：按照如下合成工艺流程一合成咪唑：

步骤二：按照如下合成工艺流程二合成氯代(邻氯苯基)二苯基甲烷：

步骤三：按照如下合成工艺流程三合成克霉唑：

因此克霉唑由咪唑合成工艺存在引入基因毒性杂质甲醛与乙二醛风险，因此需研发一种氯氮平原料药中潜在的基因毒杂质即甲醛与乙二醛快速、有效地含量检测分析方法，并对该方法进行方法学验证以评价检测方法，以便控制克霉唑原料药品质量。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种克霉唑原料基因毒性杂质 HPLC检测方法及方法学验证，快速、有效的检测克霉唑原料药中潜在的基因毒杂质即甲醛和乙二醛，方法学验证结果符合要求，以便控制克霉唑原料质量。

本发明是通过如下的技术方案予以实现的：

一种克霉唑原料基因毒性杂质HPLC检测方法，其方法如下：取甲醛对照品或乙二醛对照品用稀释剂定量配制成对应阳性对照品储配液，取克霉唑原料与稀释剂或对应阳性对照品储配液、磷酸溶液、衍生溶液衍生化反应、与稀释剂配制为供试品溶液和阳性供试品溶液，取对应阳性对照品储配液、供试品溶液和阳性供试品溶液分别注入液相色谱仪、在柱温30-35℃、流通相为乙腈和水、流速为0.5-1ml/min下检测、记录色谱图，按下式计算甲醛或乙二醛含量：

式中A_{供试品溶液}为供试品溶液色谱图中甲醛或乙二醛的峰面积；A_{阳性供试品溶液}为阳性供试品溶液色谱图中甲醛或乙二醛的峰面积；C_{阳性对照品贮备液}为阳性对照品贮备液中甲醛或乙二醛的浓度(μg/ml)；W为供试品溶液克霉唑称重(g)；

检测甲醛含量时，稀释剂采用乙腈、衍生溶液采用2,4-二硝基苯肼与乙腈配制而成，液相色谱仪的色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、柱温为30℃、以乙腈与水体积比75:25为流动相、运行时间40min；流速0.5ml/min、检测波长为355nm、进样体积为10-20μl；

检测乙二醛含量时，稀释剂采用无水乙醇、衍生溶液采用2,4-二硝基苯肼与无水乙醇配制而成，液相色谱仪的色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、柱温为35℃、以乙腈与水体积比70:30为流动相、运行时间 25min；流速1ml/min、检测波长为400nm、进样体积为10-20μl；

进一步地，配制供试品溶液和阳性供试品溶液时，取克霉唑原料与稀释剂或对应阳性对照品储配液每分钟150转振摇30min后过滤、取滤液加入磷酸溶液、衍生溶液在70℃下以每分钟150转振摇1h后、再加入稀释剂混匀后过滤、取续滤液。