[发明专利]谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307及其表面展示系统和构建方法有效
| 申请号： | 202110941639.X | 申请日： | 2021-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN113603755B | 公开（公告）日： | 2023-06-16 |
| 发明（设计）人： | 郑穗平;林珂瑞;韩双艳;林影 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C07K14/34 | 分类号： | C07K14/34;C07K14/435;C12N15/31;C12N15/12;C12N15/56;C12N15/62;C12N15/77;C12N9/26 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 刘瑜 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 谷氨酸 杆菌 蛋白 ncgl1307 及其 表面 展示 系统 构建 方法 | ||
1.一种谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307在构建表面展示系统中的应用，其特征在于：
所述的谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
所述的表面展示系统是以谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307为锚定蛋白，将靶蛋白固定在谷氨酸棒杆菌细胞表面构成的谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统；
所述的靶蛋白为增强绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白或α-淀粉酶。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307的编码序列如SEQ ID NO:2所示。
3.一种谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统，其特征在于：是以权利要求1中所述的谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307为锚定蛋白，将靶蛋白固定在谷氨酸棒杆菌细胞表面构成的；
所述的靶蛋白为增强绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白或α-淀粉酶。
4.权利要求3所述的谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将编码权利要求1中所述谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307的基因克隆到表达载体的表达盒中，得到以谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307为锚定蛋白的表面展示表达载体；
(2)将靶蛋白的基因序列克隆到步骤(1)中得到的表面展示表达载体的谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307的基因序列的上游，与所述谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307的基因形成融合基因；
(3)转化谷氨酸棒杆菌，然后根据表达载体上的筛选标记筛选阳性转化子，即得到所述谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统。
5.根据权利要求4所述的谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
(i)将编码权利要求1中所述谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307的基因、靶蛋白的基因和表达载体通过同源重组的方式，构建得到重组质粒；
(ii)将步骤(i)中得到重组质粒转化谷氨酸棒杆菌，挑取阳性转化子，得到所述谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统；
步骤(i)中所述的靶蛋白为增强绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白或α-淀粉酶；
所述的增强绿色荧光蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；
所述的红色荧光蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示；
所述的α-淀粉酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:21所示；
步骤(i)中所述的表达载体为带有卡那霉素抗性的谷氨酸棒杆菌表达载体。
6.根据权利要求5所述的谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，其特征在于：
步骤(i)中所述的表达载体为谷氨酸棒杆菌表达载体pEC-XK99e。
7.权利要求1中所述的谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307、编码权利要求1中所述谷氨酸棒杆菌蛋白Ncgl1307的基因或权利要求3所述的谷氨酸棒杆菌细胞表面展示系统在制备淀粉酶中的应用，其特征在于：所述的淀粉酶为α-淀粉酶。
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