[发明专利]一种基于表面修饰的功能化红细胞及其制备方法和在分离外泌体中的应用

权利要求书

1.一种基于表面修饰的功能化红细胞的制备方法，其特征在于，将anti-RBC与红细胞混合，于40~50℃反应1~2h后，再进行活化，活化结束后加入外泌体的特异性适配体进行修饰；所述特异性适配体为Apt-CD63，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；具体制备过程如下：

（1）配制MES缓冲液

（2）分离洗涤红细胞；

（3）将红细胞与anti-RBC以体积比为1:5~50的比例混合，于40~50℃反应1~2h，反应期间翻转反应容器5~6次；

（4）将步骤（3）所得红细胞/anti-RBC复合物、EDC、NHS、MES混合均匀，于室温静置活化15~20min，然后加入特异性适配体，于4℃放置10~12h，期间每15min混匀一次；其中，红细胞/anti-RBC复合物、EDC、NHS以及适配体的体积比为15~20:1~2:1~2:1；

所述EDC的浓度为5mM；NHS的浓度为12.5mM；适配体的浓度为100μM；红细胞/anti-RBC复合物的浓度为5×10¹²/L

（5）于4℃，4000~5000rpm离心步骤（4）所得溶液，然后收集下层的功能化红细胞即可。

2.权利要求1所述方法制备得到的功能化红细胞。

3.采用权利要求2所述的功能化红细胞分离外泌体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将血浆用等体积的PBS稀释混匀；

（2）将功能化红细胞与血浆混匀后，4℃，3000~4000rpm离心1~5min后收集固相产物；

（3）用PBS将固相产物吹打混匀，然后加入核酸酶，于4℃，3000~4000rpm离心5~10min，收集离心液相即可获得外泌体。

4.一种用于进行外泌体分离的试剂盒，其特征在于，包括权利要求2所述的功能化红细胞。