[发明专利]一种用于特异性检测丙溴磷的电化学发光适配体传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于特异性检测丙溴磷的电化学发光适配体传感器，其特征在于：所述的电化学发光适配体传感器由适配体负载于复合材料Au@AgNPs/AuNPs@MWCNTs修饰铂金电极的表面而成，用于电化学发光检测丙溴磷。

2.根据权利要求1所述的用于特异性检测丙溴磷的电化学发光适配体传感器，其特征在于：所述丙溴磷适配体核苷酸序列如下所示5’-SH-AAGCTTGCTTTATAGCCTGCAGCGATTCTTGATCGGAAAAGGCTGAGAGCTACGC-3’。

3.根据权利要求1所述用于特异性检测丙溴磷的电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于：所述的制备方法如下：

S1.纳米金多壁碳纳米管（AuNPs@MWCNTs）的制备：将2.0 mg羧基功能化的多壁碳纳米管加入到4 mL 1%聚乙烯亚胺溶液中（PEI），超声分散；离心10 min以去除多余的PEI；然后用2 mL超纯水将剩余的沉淀物重新分散，制备PEI功能化的MWCNTs；将1mL 纳米金溶液（AuNPs）滴加到1mL制备的PEI功能化MWCNTs的溶液中，搅拌过夜;离心得到的黑色固体再分散于2 mL 磷酸盐缓冲液（pH=7.4）中，此时就得到AuNPs@MWCNTs溶液；

S2. 具有核壳结构的纳米金银复合材料（Au@AgNPs）的制备：首先，将12 µL L-抗坏血酸（AA：100 mM）、3 µL 硝酸银（AgNO3：100 mM）和15 µL氢氧化钠（NaOH：100 mM）分别加入到2 mL制备好的AuNPs (15 nm)溶液中，将混合溶液的pH值调整为8.5左右；然后将上述溶液用磁力搅拌器缓慢匀速搅拌30 min，然后以1800 rpm离心20 min；除去上清液后，将剩余的液体重新分散到10 mL超纯水中，此时完成一次添加；重复上述步骤再添加四次完成Au@AgNPs的合成；

S3. 传感器的构建

将珀金电极抛光，依次用无水乙醇和去离子水混合液超声，用氮气吹干；1 µL AuNPs@MWCNTs溶液修饰在预处理后的铂金电极表面室温下干燥；再将1 µL 0.01 M鲁米诺滴在铂金电极表面，室温自然干燥；随后在铂金电极表面滴上1 µL Au@AgNPs溶液，在空气中干燥；接着在铂金电极表面滴上1 µL丙溴磷适配体传感器，在空气中干燥；然后将修饰的铂金电极浸泡在0.5 %的BSA中阻断非特异性位点，得到BSA/适配体/Au@AgNPs/鲁米诺/AuNPs@MWCNTs/PE。

4.一种基于电化学发光适配体传感器检测丙溴磷的方法，其特征在于：以权利要求1-3任一项所述的电化学发光适配体传感器作为工作电极，饱和甘汞为参比电极，铂丝电极为对电极组成三电极体系，样品中的丙溴磷被定量捕捉到传感器的表面，通过产生的发光信号用于检测丙溴磷。

5.根据权利要求4所述的检测丙溴磷的电化学发光适配体传感器的应用，其特征在于，具体步骤为：

A1.含过氧化氢（H₂O₂）的PBS缓冲溶液的配制：用pH为9.0的0 .1mol/L的PBS 缓冲溶液配制含10 nM H₂O₂的PBS缓冲溶液

A2.不同浓度的丙溴磷标准溶液的配制：准确称取一定量的丙溴磷，用PBS（pH=7.4）配制10 μg/mL丙溴磷溶液，再将上述溶液稀释得到一系列不同浓度的丙溴磷标准溶液，浓度范围为100 fg/mL~1µg/mL

A3.传感器条件的优化：对适配体的浓度、PBS缓冲底液的pH值、丙溴磷与适配体的孵育时间分别进行优化；配制不同浓度的丙溴磷适配体，浓度范围为1nM~10⁴nM；配制不同pH值含10 nM过氧化氢（H₂O₂）的PBS缓冲溶液，pH范围为7.0~10.0；将丙溴磷与适配体的孵育时间控制在20分钟到70分钟范围内；通过对影响传感器的相关条件进行优化得出最佳的实验条件，使适配体传感器的性能得到最大程度的发挥

A4.标准曲线的绘制：将所述电化学发光适配体传感器置于步骤A2配制的不同浓度的丙溴磷标准溶液中浸泡相同时间，使电化学发光适配体传感器结合丙溴磷，然后取出并淋洗，作为工作电极，饱和甘汞为参比电极，铂丝电极为对电极组成三电极体系，以步骤A1中的含过氧化氢（H₂O₂）的PBS缓冲溶液为电解液在电化学发光工作站进行测量；记录发光强度-时间曲线，建立电化学发光适配体传感器结合丙溴磷的发光强度与丙溴磷标准溶液中的丙溴磷浓度对数值的线性关系，得到相应的线性回归方程

A5.样品中丙溴磷的检测：所述样品先经过预处理再放入电化学发光适配体传感器浸泡相同时间，使电化学发光适配体传感器结合丙溴磷，然后取出并冲洗，作为工作电极，再采用步骤A4方法检测发光强度，再根据线性回归方程计算出样品中丙溴磷的浓度。