[发明专利]一种栅电极修饰方法、栅控石墨烯晶体管生物传感器及miRNA浓度检测方法

权利要求书

1.一种miRNA浓度检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将栅控石墨烯晶体管生物传感器浸入PBS溶液中，加入H₂O₂，在固定的源极和漏极之间的电压下，改变栅电极的电压，测量沟道电流；

所述栅控石墨烯晶体管生物传感器，包括修饰得到的栅电极，还包括基底，所述基底上设有源极和漏极，所述基底位于所述源极和所述漏极之间形成沟道，所述沟道上设有石墨烯；

所述栅电极修饰方法，包括以下步骤：

提供一栅电极；

将壳聚糖加入至链霉亲和素溶液中，得到第一混合物；

将第一混合物滴加至栅电极上，然后滴加HP-2核酸溶液培育后得到HP-2修饰栅电极；

配制ST/HP-1杂交核酸，然后将目标物miRNA141和ST/HP-1杂交核酸混合，再加入T7核酸外切酶，最后进行酶失活处理得到第二混合物；

将第二混合物滴加至HP-2修饰栅电极上得到第二混合物修饰电极；

其中，HP-2核酸的基因序列如SEQ ID NO:1所示；

ST核酸的基因序列如SEQ ID NO:2所示；

HP-1核酸的基因序列如SEQ ID NO:3所示；

将第二混合物滴加至HP-2修饰栅电极上之后还包括：

将环状DNA溶液和HP-3核酸溶液混合得到第三混合物，将第三混合物滴加至第二混合物修饰栅电极上培育，再置于滚环扩增混合液中进行滚环扩增，最后置于血红素溶液中浸泡；

其中，环状DNA的基因序列如SEQ ID NO:4所示；

HP-3核酸的基因序列如SEQ ID NO:5所示；

所述链霉亲和素溶液的浓度为0.1~0.2mg/mL，第一混合物中壳聚糖的质量浓度为1~3%；

所述栅电极为玻碳电极；

所述HP-2核酸溶液的浓度为4~6μM；

ST/HP-1杂交核酸具体为：将ST核酸溶液与HP-1核酸溶液混合，于90~100℃下退火3~7min，然后加入核酸外切酶I，于70~80℃下保持5~15min进行酶失活处理，ST核酸溶液与HP-1核酸溶液的浓度均为90~110nM；

第二混合物的配制方法具体为：取0.2 μL ST/HP-1杂交核酸溶液，1 μL RNase 抑制剂，1 μL T7核酸外切酶，1μL 10×T7核酸外切酶缓冲液，5μL浓度分别为25 fM、250 fM、2.5pM、25 pM、250 pM、2.5 nM、25 nM的miRNA141，以及1.8 μL的DEPC水配成10 μL的溶液在37℃培养箱中培养1h，即为第二混合物；

所述滚环扩增混合液包括Phi29 聚合酶、10xPhi29聚合酶缓冲液和dNTPs；

所述环状DNA溶液的浓度为1~2μM；

所述HP-3核酸溶液的浓度为4~6μmol/L；

所述血红素溶液的配制方法为：将血红素加入至二甲亚砜水溶液中，所述血红素的浓度为8~12μM。

2.如权利要求1所述的miRNA浓度检测方法，其特征在于，所述源极和漏极的材料均为Cr以及层叠在Cr上的Au。

3.如权利要求1所述的miRNA浓度检测方法，其特征在于，通过湿法转移法将石墨烯转移至沟道上。

4.如权利要求1所述的miRNA浓度检测方法，其特征在于，所述基底为玻璃基底。