[发明专利]一种苹果组培初代材料的培养方法

权利要求书

1.一种苹果组培初代材料的培养方法，其特征在于包括砧木种子的低温沙藏处理、种子的灭菌、无菌催芽、小苗扩繁培养工艺，具体步骤如下：

a、砧木种子低温沙藏处理：将成熟饱满的种子浸泡后用湿河沙拌匀，装在带有透气孔的组培瓶内，放在2-4℃低温中冷藏处理，沙藏期间需翻动检查防止湿度过大或过小，观察到种子露白后从低温中取出灭菌；

b、露白种子的灭菌：将低温处理后露白的种子从沙子中清洗出来，先使用流水冲洗再使用浓度为75%的酒精和浓度为0.1%的升汞浸泡，最后使用无菌水冲洗；

c、灭菌后种子的催芽：将灭菌后的种子放置在铺有滤纸且经高压灭过菌的培养瓶内，将培养瓶置于20-24℃的培养室催芽；

e、芽苗的转接：当种子萌芽长到1.5-2.5cm且具有3-4片真叶时，在超净工作台上，剪取根茎上部小苗接入扩繁培养基中，连续重复转接2-3次培养，在小苗扩繁到一定数量之后，再进行热处理结合茎尖培养脱毒，筛选适宜培养基进行工厂化生产。

2.根据权利要求1所述的一种苹果组培初代材料的培养方法，其特征在于：所述步骤a中将成熟饱满的种子用常温水浸泡20-24h后用5-10倍于种子的湿河沙拌匀。

3.根据权利要求1或2所述的一种苹果组培初代材料的培养方法，其特征在于：所述步骤a中低温冷藏处理时百粒重0.5-2.0g的种子处理35-40d、百粒重2.0g-3.5g的种子处理55-60d。

4.根据权利要求3所述的一种苹果组培初代材料的培养方法，其特征在于：所述步骤a河沙湿度手握成团，一触即散为宜。

5.根据权利要求1或4所述的一种苹果组培初代材料的培养方法，其特征在于：所述步骤b中先将低温处理后露白的种子在室温下放置20-24h后从沙子中清洗出种子，先用流水冲洗20 -30min,然后将种子分别用浓度为75%的酒精浸泡10-15s和浓度为0.1%的升汞浸泡15-20min，最后用无菌水冲洗3-5次，浸泡时进行摇动，使种子和灭菌剂紧密接触。

6.根据权利要求5所述的一种苹果组培初代材料的培养方法，其特征在于：所述步骤c中在将灭菌后的种子放置在铺有滤纸且经高压灭过菌的培养瓶内时，在滤纸上滴入无菌水使其湿润。

7.根据权利要求1或6所述的一种苹果组培初代材料的培养方法，其特征在于：所述步骤e中培养基为：MS+6-BA0.6～0.8 mg/l+IBA0.1～0.2 mg/l,白砂糖8-10g、琼脂粉5-7g。

8.根据权利要求7所述的一种苹果组培初代材料的培养方法，其特征在于：所述步骤e中培养时先暗培养3-5d,再光照培养。