[发明专利]一种橄榄苦苷的纯化方法及其应用

说明书

精密称取研磨至粉末状的橄榄苦苷原料，加入纯甲醇溶液，超声提取，滤液采用微孔滤膜过滤，于冰箱冷藏备用。将备用样品与3倍重量硅胶进行拌样，使其混合均匀，制成粉末。首先进行硅胶柱层析等度洗脱，干法上样。使用高效液相色谱法筛选出含量大于80％的样品，进行旋转蒸发，用水复溶，冷冻干燥成粉末。其次进行硅胶柱层析梯度洗脱，将大于80％的样品溶解于甲醇，继续与3倍硅胶混合蒸干成粉末，干法上样。使用高效液相色谱筛选出含量大于98％的高纯度橄榄苦苷样品。合并高含量的洗脱流分，减压旋转蒸馏回收样品后，冻干成粉末即得橄榄苦苷柱层析产品。

 发明人：孙永跃 尹伊 赵佳颖 金文之

申请人：天津理工大学 天津先德科技有限责任公司

技术领域

本发明属于提取纯化技术领域，尤其是橄榄苦苷的纯化方法和应用。

背景技术

橄榄苦苷是一种天然植物提取物，主要来源油橄榄树叶中。橄榄苦苷具有强力的抗细菌和抗病毒特性、还有极强的抗氧化能力。其分子式为C₂₅H₃₂O₁₃，是一种无毒的裂环烯醚萜苷类化合物。研究表明橄榄苦苷具有抗炎，抗真菌，抗病毒，抗氧化，以及抗癌和降血糖等多种作用。易溶于水、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂。酸、碱、高温等条件都可使橄榄苦苷降解为羟基酪醇等物质。橄榄苦苷暴露在空气和阳光下会分解，通常在避光条件下低温密封保存。

目前，橄榄苦苷的主要纯化方式为有机溶剂萃取法、大孔树脂吸附色谱法。此工艺得到的橄榄苦苷产品纯度不高，且过程繁琐，浪费溶剂，难以满足现在的科研需求，并且橄榄叶中的橄榄苦苷资源，不能得到更好地利用。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足之处，提供橄榄苦苷的纯化方法和应用。

本发明取得的优点和积极效果为：

1、本发明旨在解决市面上高纯度橄榄苦苷稀缺且价格昂贵的问题。本发明方法建立了从现有橄榄叶提取的橄榄苦苷粗品，经过硅胶柱层析等度洗脱初步纯化、硅胶柱层析梯度洗脱二次纯化等技术，由高效液相色谱法与核磁共振法进行含量测定，最后冷冻干燥，得到纯度为98％以上的橄榄苦苷柱层析产品。本发明方法工艺步骤较为简单易行，耗时短，溶剂消耗量少，所得柱层析产品中橄榄苦苷纯度较高，可以满足科学研究中对橄榄苦苷样品的纯度要求，也比较适宜投入到工业发展中。

2、本发明方法首先建立了一种联合硅胶柱层析等度洗脱方法和梯度洗脱方法将橄榄苦苷粗品中橄榄苦苷的纯度提高到98％以上，同时具有较高的收率。并在最优的条件下实现工艺放大研究，可用于大批量橄榄苦苷样品的生产中。

附图说明

图1为本发明中橄榄苦苷粗提液的薄层色谱图；展开剂为甲醇∶二氯甲烷＝10∶1，由薄层色谱图可以观察到，橄榄苦苷主要分成了两部分，且Rf值在0.3-0.5 之间，所以可以用硅胶柱层析梯度洗脱；

图2为本发明中橄榄苦苷的标准曲线，拟合的回归曲线方程为y＝6598546x -68043R²＝0.9999。高效液相色谱参数：C₁₈色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相甲醇-水(0.2％醋酸)＝(45∶55)，流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，柱温箱温度25℃，进样体积为10μL。由此标准曲线结合液相色谱图及峰面积，可以计算样品中橄榄苦苷的含量和回收率；

图3为本发明中橄榄苦苷粗品经一次200-300目硅胶柱层析分离纯化后得到的柱层析产品的液相色谱图；