[发明专利]一种载脂蛋白修饰的融合型多功能纳米囊泡及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种载脂蛋白修饰的融合型多功能纳米囊泡及其制备方法和应用，所述多功能融合型纳米囊泡主要是由仿生脂蛋白与外泌体融合而成，所述仿生脂蛋白主要由载脂蛋白生物肽、磷脂和纳米酶共同构成，所述外泌体被抗原冲击并负载有光敏剂。其制备方法包括孵育法、挤出法、冻融法、聚乙二醇诱导法和超声破碎法。本发明制备方法条件简单、成本低廉，制得的载脂蛋白修饰的融合型多功能纳米囊泡具有高度内源性、生物安全性、载药能力强、专属性、病灶部位靶向性和载药模式多样性等优点。该纳米药物递送系统能够实现“诊疗一体化”以及“多模式治疗”，能够实现对于复杂的进行性疾病例如肿瘤、神经退行性疾病等的早期诊断、靶向高效治疗。

技术领域

本发明属于纳米制剂技术领域，具体涉及一种载脂蛋白修饰的融合型多功能纳米囊泡及其制备方法和应用法。

背景技术

外泌体是直径为40nm-160nm的脂质双分子膜囊泡，广泛分布于各种体液中，几乎所有活细胞都会分泌，包括干细胞、免疫细胞、肿瘤细胞等。外泌体是由内体膜向内萌芽形成多囊泡小体(MVB)而形成的。随后，通过MVB与质膜融合，将外泌体释放到细胞外空间。从细胞表面释放后，外泌体可与细胞外基质相互作用，或被远端或邻近细胞摄取，从而发挥细胞间通讯功能。这种细胞间小泡运输途径在人类健康和疾病的许多方面发挥着重要作用，包括发育、免疫、组织内稳态、癌症和神经退行性疾病等。外泌体是多种生物分子的载体，如蛋白质、脂类、核酸和糖复合物。已经证实，一系列蛋白在外泌体中富集，包括胞质和膜蛋白，例如膜联蛋白II和热休克蛋白(HSP)，主要组织相容性复合体II类(MHC II)，整联蛋白和四跨膜蛋白，ALG-2相互作用蛋白X(Alix)，肿瘤易感基因101(TSG101)以及可能对外泌体功能有影响的细胞特异性蛋白质。外泌体具有诸多使其成为潜在治疗途径和药物递送系统的特性。例如，外泌体携带并保护大量核酸，并且能够将它们的功能传递到受体细胞中。由于它们的表面带负电荷，并且能够通过显示表面蛋白CD47来避免单核吞噬系统，因此它们在循环中具有内在的稳定性。外泌体具有跨越多种生物屏障、利用内源性细胞内转运机制和在受体细胞摄取时触发反应的能力。此外，它们可能表现出固有的靶向特性，这由它们的脂质组成和蛋白质含量决定。与合成的载体相比，Exos具有几个特点：1)天然的携带RNA、DNA和蛋白质的能力；2)低免疫原性、良好的生物相容性；3)源自母细胞的固有靶向特性；4)穿透能力佳，可以跨越多种生物屏障，尤其是血脑屏障(BBB)。

树突状细胞(DC)是最强大的抗原呈递细胞。DC通过其捕获、加工和呈递抗原的强大能力激活并刺激T和B细胞的增殖，然后诱导免疫反应。基于这种能力，已经进行了许多DC疫苗的免疫治疗研究。近年来，肿瘤裂解物已被用作DC疫苗的抗原来源。DC来源的外来体(Dex)是纳米大小的膜囊泡，可以迁移到肿瘤或脾脏，并直接或间接将抗原呈递给CD4⁺和CD8⁺T细胞，从而诱导免疫应答。

脂蛋白是一类由肝脏和肠道产生的生物源性、内在稳定性和非免疫原性的异质性纳米粒。HDL是脂蛋白家族中最小、密度最大的颗粒，直径仅为10nm，主要由载脂蛋白A 1(apoA-1)和磷脂组成。成熟脂蛋白结构为球形，由亲脂性内核(主要是甘油三酸酯和胆固醇酯)以及外周包被的磷脂单层、载脂蛋白构成内疏水-外亲水的结构。它的内源性使HDL特别适合用作靶向多种疾病的纳米载体平台。