[发明专利]在线固相萃取、液相色谱-串联质谱法测定血浆中3种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法

权利要求书

1.在线固相萃取、液相色谱-串联质谱法测定血浆中3种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，其特征在于，3种酪氨酸激酶抑制剂分别为吉非替尼、奥希替尼、埃克替尼，包括如下步骤：

0～1min，固相萃取柱的进样端通过切换阀与萃取泵以及自动进样器连通，出样端通过切换阀与排废口连通，分析泵通过切换阀与液相色谱-串联质谱连通；稀释后的新鲜血浆或干血浆样品经溶剂溶解后经所述萃取泵以及自动进样器进入所述固相萃取柱内进行净化处理；

1～3min，调整切换阀，将所述固相萃取柱的两端分别与液相色谱分析柱以及分析泵连通，分析泵将分析物从固相萃取柱转移至液相色谱分析柱内进行分析；

3～5min，调整切换阀至0～1min时的连接状态，萃取泵冲洗固相萃取柱并将流动相平衡至初始状态，分析泵配合液相色谱-串联质谱继续完成分析物的分离，

其中，固相萃取柱选自WelchPolar-RP；液相色谱分析柱选自WatersXBridgeC18，尺寸规格为4.6×100mm，3.5μm，

固相萃取柱和液相色谱分析柱的流动相相同，流动相A为乙腈，流动相B为含有0.1％甲酸、浓度为5mmol/L的醋酸铵溶液；萃取及分析过程中，不同时间段，流动相A与流动相B件间的体积比不同，

分析过程中，在萃取段，0～0.5min时，流动相A与流动相B的体积比为10:90；0.5～0.51min，流动相A与流动相B的体积比由10:90变化为80:20；0.51～1.0min时，流动相A与流动相B的体积比为80:20；1.0～3.0min时，流动相A与流动相B的体积比由80:20变化为10:90；3.0～5.0min时，流动相A与流动相B的体积比为10:90；在分析段，0～0.51min时，流动相A与流动相B的体积比为25:75；0.51～0.6min时，流动相A与流动相B的体积比由25:75变化为80:20；0.6～3.5min时，流动相A与流动相B的体积比为80:20；3.5～3.51min时，流动相A与流动相B的体积比由80:20变化为25:75；3.51～5min时，流动相A与流动相B的体积比为25:75。

2.根据权利要求1所述的在线固相萃取、液相色谱-串联质谱法测定血浆中3种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，其特征在于：

其中，固相萃取泵流速为1.5mL·min^-1，分析泵流速为1.0mL·min^-1。

3.根据权利要求1所述的在线固相萃取、液相色谱-串联质谱法测定血浆中3种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，其特征在于：

其中，液相色谱分析柱后通过三通分流，进入质谱分析，柱温为40℃，进样体积50μL。

4.根据权利要求1所述的在线固相萃取、液相色谱-串联质谱法测定血浆中3种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，其特征在于：

其中，质谱采用电喷雾离子源，正离子检测模式，选择MRM工作方式进行一/二级质谱检测；

离子源参数：气帘气25psi，碰撞气10psi，雾化气50psi，辅助气45psi，喷雾电压5500V，离子源温度500℃；

吉非替尼、奥希替尼、埃克替尼及内标伏立康唑的去簇电压、入口电压、碰撞电压、出口电压以及用于定量分析的离子通道相关信息见下表：