[发明专利]一种多能干细胞来源的角质形成细胞的培养方法在审
| 申请号： | 202110950784.4 | 申请日： | 2021-08-18 |
| 公开（公告）号： | CN113564101A | 公开（公告）日： | 2021-10-29 |
| 发明（设计）人： | 曹哲厚;吴立前;马悦悦 | 申请（专利权）人： | 杭州原生生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 武汉菲翔知识产权代理有限公司 42284 | 代理人： | 梁燕飞 |
| 地址： | 311215 浙江省杭州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 多能 干细胞 来源 角质 形成 细胞 培养 方法 | ||
1.一种多能干细胞来源的角质形成细胞的培养方法，其特征在于，包括培养基和ROCK抑制剂，所述培养基以KeratinocyteGrowth Medium2为基础培养基，具体步骤如下：
S1.基于培养基，使用包被六孔板，在细胞培养箱中静置0.8～1h备用；
S2.将6孔细胞培养板中的包被液体吸出；
S3.加入1mL DPBS洗涤细胞一次，吸弃DPBS；
S4.往细胞培养板中加入1×Accutase消化细胞,在细胞培养箱里孵育4.8～5分钟，然后加入4mL KeratinocyteGrowth Medium2终止消化反应；
S5.并将6孔板的液体转移至15mL离心管,并在300g条件下离心5分钟；离心后去上清，加入DPBS轻轻重悬细胞，在300g条件下离心5分钟，离心后去上清；加入2mLKeratinocyteGrowth Medium2轻轻重悬细胞，然后转移到包被Matrigel的培养板中，往培养基中添加ROCK抑制剂，将培养板放回CO2细胞培养箱。
S6.第二天进行换液，将细胞将培养板上旧的培养液去掉，加入2mLKeratinocyteGrowth Medium2；
S7.之后每2天更换一次培养液，直至细胞融合度达到80％时进行传代。
2.如权利要求1所述的一种多能干细胞来源的角质形成细胞的培养方法，其特征在于：使用Matrigel胶作为包被基质。
3.权利要求1或2所述的一种多能干细胞来源的角质形成细胞的培养方法，其特征在于：使用浓度范围在5-50uM的ROCK抑制剂作为培养基添加剂。
4.如权利要求1所述的一种多能干细胞来源的角质形成细胞的培养方法，其特征在于：ROCK抑制剂作为培养基添加剂的浓度为10uM。
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