[发明专利]一种高效生产类胡萝卜素的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种高效生产类胡萝卜素的基因工程菌，所述类胡萝卜素为β-胡萝卜素、斑蝥黄或虾青素，其特征在于，所述基因工程菌以产β-胡萝卜素、斑蝥黄或虾青素的工程菌株为出发菌，其染色体上整合过表达了多向耐药性转录因子编码基因PDR3；

或者，所述基因工程菌以产β-胡萝卜素、斑蝥黄或虾青素的工程菌株为出发菌，宿主菌内含有包含了多向耐药性转录因子编码基因PDR3的重组表达质粒；

其中，多向耐药性转录因子编码基因PDR3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述的高效生产类胡萝卜素的基因工程菌，其特征在于，所述产斑蝥黄的工程菌株以产β-胡萝卜素的工程菌株为出发菌，其染色体上整合了β-胡萝卜素酮化酶编码基因；或者，宿主菌内含有包含了β-胡萝卜素酮化酶编码基因的重组表达质粒。

3.如权利要求2所述的高效生产类胡萝卜素的基因工程菌，其特征在于，所述β-胡萝卜素酮化酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.如权利要求2所述的高效生产类胡萝卜素的基因工程菌，其特征在于，所述产β-胡萝卜素的工程菌株采用工程菌株Ycarot-02；所述产虾青素的工程菌株采用工程菌株YPP-17。

5.如权利要求1-4任一项所述的高效生产类胡萝卜素的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括：以产β-胡萝卜素、斑蝥黄或虾青素的工程菌株为出发菌，通过整合质粒将多向耐药性转录因子编码基因PDR3整合到工程菌株染色体上，获得高效生产β-胡萝卜素、斑蝥黄或虾青素的基因工程菌；

或者以产β-胡萝卜素、斑蝥黄或虾青素的工程菌株为出发菌，导入包含了多向耐药性转录因子编码基因PDR3的重组表达质粒；

其中，PDR3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

6.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的多向耐药性转录因子编码基因PDR3克隆到pUMRI-YPL062W的P_GAL1后面的多克隆位点，获得重组质粒pUMRI-YPL062W-PDR3；

(2)将重组质粒pUMRI-YPL062W-PDR3转化到产β-胡萝卜素、斑蝥黄或虾青素的工程菌株中，筛选获得染色体中整合过表达了多向耐药性转录因子编码基因的重组菌，即为所述的高效生产类胡萝卜素的基因工程菌。

7.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述产斑蝥黄的工程菌株的构建方法包括：

1) 将核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的β-胡萝卜素酮化酶编码基因克隆到PUMRI-DPP1的P_GAL1后面的多克隆位点，获得重组质粒PUMRI-DPP1-OBKTM29；

2) 将重组质粒PUMRI-DPP1-OBKTM29转化到产β-胡萝卜素的工程菌株中，筛选获得染色体中整合了β-胡萝卜素酮化酶编码基因的重组菌，即为所述产斑蝥黄的工程菌株。

8.如权利要求1-4所述的高效生产类胡萝卜素的基因工程菌在制备β-胡萝卜素、斑蝥黄或虾青素中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，包括：将所述的高效生产类胡萝卜素的基因工程菌扩大培养后，接种于YPD液体培养基中，振荡培养，得到发酵液；收集发酵液中的菌体，细胞破碎后萃取相应的β-胡萝卜素、斑蝥黄或虾青素。