[发明专利]一种绿原酸缀合物及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种绿原酸缀合物及其制备方法和应用，将HA水溶液与EDC水溶液、DMAP混合均匀后，加入溶有绿原酸CGA的DMF溶液并于常温下反应18‑25h，反应结束后反应液经透析、冷冻干燥即得绿原酸缀合物HA‑CGA；所述HA、EDC和绿原酸的摩尔比为1：（1‑4）：（1‑2）。本发明通过化学合成修饰改造得到水溶性极好的HA‑CGA，并经试验发现：HA‑CGA在抗菌等方面性能得到了极大的提高。

技术领域

本申请属于生物制药技术领域，具体涉及一种绿原酸缀合物及其制备方法和在抗菌方面的应用。

背景技术

绿原酸（Chlorogenic acid, CGA）又名咖啡宁酸，属于苯丙素类物质，主要存在于忍冬科忍冬属和菊科嵩属植物中，是人类饮食中含量最丰富的多酚类化合物之一，是某些植物产生的一组酚类次生代谢产物，是咖啡的重要成分。CGA表现出很好的生物学特性，具有抗病毒、抗菌、消炎、清除自由基等多种药理作用。

透明质酸（Hyaluronic acid, HA）又名玻璃酸，在高等动物体内以及人体各组织内广泛分布，是天然存在于细胞外基质和滑膜液的一种高分子量线性大分子酸性黏多糖，是细胞外基质的重要组成部分。HA具有高亲水性、优异的生物相容性以及生物可降解性，因此HA多用于结构修饰其他药物，进而来增加该药物的水溶性，提高其生物利用度。

我们对CGA的抗菌性能进行了研究，但发现CGA的水溶性差，在25℃水中的溶解率仅仅5%，这大大影响了它的抗菌性能。我们利用水溶性良好的透明质酸对绿原酸进行结构修饰，得到的绿原酸缀合物水溶性良好，其抗菌性能也得到了大幅度提高。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种绿原酸缀合物及其制备方法和在抗菌方面的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种绿原酸缀合物的制备方法，在N- (3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）、4-二甲氨基吡啶（DMAP）和DMF存在下，通过酯化反应合成了绿原酸缀合物HA-CGA，合成路线如图1所示；具体步骤为：将透明质酸（HA）水溶液与EDC水溶液、DMAP混合均匀后，加入溶有绿原酸（CGA）的DMF溶液并于常温下反应18-25h，反应结束后反应液经透析、冷冻干燥即得绿原酸缀合物HA-CGA；

所述HA、EDC和绿原酸的摩尔比为1:（1-4）:（1-2），优选1:4:1。

作为优选，上述绿原酸缀合物的制备方法中，透析用透析袋的截留分子量为2000-3500。

作为优选，上述绿原酸缀合物的制备方法中，冷冻干燥是在-20℃冰箱预冷冻2h后置于冷冻干燥机中进行冻干48h。

本发明提供了采用上述方法制备得到的绿原酸缀合物。

本发明还提供了上述绿原酸缀合物在制备抗菌药物方面的应用。

和现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1）本发明通过化学合成得到水溶性极好的HA-CGA。本发明的主要目的是通过修饰改造CGA以提高其水溶性，并在抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌和抗过敏等方面得到更好的发展；

2）本发明在对HA-CGA合成的研究中，首次发现将HA与CGA合成HA-CGA能够极大的提高CGA的水溶性。此外，本发明还研究了HA-CGA的抗菌能力。在抗菌实验中，采用平板计数法测得HA、CGA和HA-CGA对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低杀菌浓度（MBC）。HA-CGA对大肠杆菌的MBC大约为0.7mg/mL，对金黄色葡萄球菌的MBC大约为0.8mg/mL。本发明经研究发现：HA-CGA在抗菌能力方面得到了显著的提高。

附图说明

图1为绿原酸缀合物HA-CGA的合成路线图；