[发明专利]一种鸡精液冷冻保存及人工输精用试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种鸡精液冷冻保存及人工输精用试剂盒，包括DJ‑I液、DJ‑II液、DJ‑III液、DMEM液、甘油、冻精细管，本发明的有益效果是，本试剂盒中的稀释液能够为鸡精子提供较好的生存环境，并且添加试剂盒中的冷冻保护剂后能够成功的进行鸡精液冷冻保存，通过应用本发明的鸡精液冷冻保存的试剂盒进行冷冻保存的鸡精液，解冻后受精率可达60％以上，满足鸡遗传资源保种的需要。

技术领域

本发明涉及家禽保种生物技术领域，具体涉及一种鸡精液冷冻保存及人工输精用试剂盒及其使用方法。

背景技术

精液冷冻保存是利用液氮(-196℃)或者干冰(-79℃)等作为冷源，将精液经过稀释、平衡、添加冷冻保护剂、再平衡等处理后，快速降温，抑制精子的新陈代谢，使精子能够长时间保存在超低温下，解冻升温后精子能够恢复受精能力，精液冷冻保存是畜禽易位保种的重要技术手段，在濒危物种的保护和重要经济动物的快速扩繁中具有重要的应用价值，然而，受家禽精子独特形态结构特征等因素的制约，目前家禽精液冷冻保存技术发展缓慢，亟待建立稳定高效的冷冻技术体系。

精液冷冻及应用流程一般分为精液的稀释、平衡、冷冻、解冻、去甘油和人工输精等，影响家禽精液冷冻效率的因素主要是冷冻技术参数，包括冷冻保护剂类型和浓度、稀释液的成分和浓度、冷却速度、精液包装类型和解冻温度等；目前，许多稀释液被用于冷冻精液的制作，包括5％～7％葡萄糖溶液、1％NaCl溶液和葡萄糖卵黄溶液，以及Lake型精液稀释液和BHSV型精液稀释液等，但其实际效果不太理想；实际研究证明，配制pH、渗透压、能量物质和抗氧化物等成分含量适宜的稀释液对于减少冷冻损伤、保护鸡精子活力和受精能力至关重要，影响鸡冷冻精液生产和鸡遗传资源保护工作成效；精液冷冻用到的稀释液种类也较多，包括初步平衡稀释液、冷冻保护液、去甘油稀释液、输精稀释液等等，配制和质控过程复杂，需要特定仪器和耗材，容易导致配制效果不稳定等，因此目前急需建立一种鸡精液冷冻保存试剂盒，能够高效、高质量、高便捷地实现鸡精液的冷冻保存，提高鸡冷冻精液制备的工作成效。

发明内容

本发明提供一种适用于鸡精液冷冻保存的试剂盒，能够有效的对鸡精液进行冷冻保存尤其适用于鸡细管冷冻精液的生产和人工授精以及精液超低温冷冻后的长期保存以及长途运输后人工输精，解冻后受精率可达到60％以上。

实现上述目的本发明的技术方案为，一种鸡精液冷冻保存及人工输精用试剂盒，包括：

DJ-I液，其为不含有渗透性保护剂的稀释液，pH 7.0～7.4，渗透压在340～390mOsm/kg，用作平衡稀释液；

DJ-II液，其为含有渗透性保护剂的稀释液，pH 7.0～7.4，渗透压在340～390mOsm/kg，用作冷冻保护液；

DJ-III液，其为不含有渗透性保护剂的稀释液，pH 7.0～7.4，渗透压在340～390mOsm/kg，用作去甘油稀释液；

DMEM液，其为高糖型细胞培养基，用作输精稀释液；

甘油，其为分析纯≥99.9％，与DJ-II液联合使用用作冷冻保护剂；

冻精细管，用于分装精液进行冷冻。

对本技术方案的进一步补充，按照1L体积计算，所述DJ-I液的制备方法为：称取葡萄糖5.5～5.8g、L-谷氨酸钠14～15g、柠檬酸钾1.10～1.25g、乙酸镁0.85～0.88g、N，N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸31～32g，加超纯水定容至1L，氢氧化钠调节pH至7.0～7.4，过滤法除菌，在-20℃密封保存。