[发明专利]一种NADH的纯化方法

说明书

本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种绿色高效低成本的还原型辅酶I纯化方法。所述方法包括步骤如下：对含NADH酶促反应液用陶瓷膜进行过滤，收集得到上清液；利用活性炭对上述步骤收集得到的上清液进行脱色处理；对完成脱色处理后的反应液进行过滤除去活性炭，再依次进行超滤和纳滤处理；再将纳滤处理后得到的滤液在减压浓缩后，得浓缩液，进行降温结晶处理，降温结晶时采用梯度降温，析出晶体，过滤、干燥，得到还原型辅酶I。本发明为克服现有还原型辅酶I纯化技术的缺陷，提供一种绿色高效低成本的还原型辅酶I纯化方法。其工艺简单易操作、成本低、产物收率高，满足工业生产的需求。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种绿色高效低成本的还原型辅酶I纯化方法。

背景技术

NADH(Nicotinamide adenine dinucleotide)是一种化学物质，是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的还原态，还原型辅酶Ⅰ。N指烟酰胺，A指腺嘌呤，D是二核苷酸。因NADH主要在细胞中参与物质和能量代谢，产生于糖酵解和细胞呼吸作用中的柠檬酸循环，并作为生物氢的载体和电子供体，在线粒体内膜上通过氧化磷酸化过程，转移能量供给ATP合成，所以NADH又被称为线粒体素。理论上，1分子NADH释放的能量，可以合成3分子ATP。

NADH不仅作为有氧呼吸作用中重要的辅酶，NADH的[H]也携带大量能量，研究已经证实，细胞外使用NADH能促进细胞内ATP水平的上升，表明NADH能穿透细胞膜并提升细胞内的能量水平。NADH能与自由基反应从而抑制脂质的过氧化反应，保护线粒体膜和线粒体功能。研究表明NADH显著促进神经递质多巴胺的产生，临床实验数据表明NADH有助于改善帕金森病的症状，NADH还能促进甲肾上腺素和血清素的生物合成，对于缓解抑郁症和老年痴呆症显示出良好的应用潜力。NADH在维持细胞生长和分化、能量代谢、细胞保护以及促进神经递质产生方面起着重要作用。

发明内容

目前，现有文献报道NADH的纯化方法主要为离子交换树脂法、色谱纯化法(CN104892710A)。该类方法虽然能获得高纯度的NADH，但其操作繁琐、填料昂贵且寿命短、纯化成本高、收率低、产能低、废水量大、难放大工业化生产。

本发明为克服现有NADH纯化技术的缺陷，提供一种绿色高效低成本的还原型辅酶I纯化方法。其工艺简单易操作、成本低、产物收率高，满足工业生产的需求。

本发明的目的是这样实现的：

在一个实施例中，提供了一种NADH的纯化方法，所述方法包括步骤如下：

(1)对含NADH酶促反应液进行过滤，收集得到上清液；

(2)对步骤(1)收集得到的上清液进行脱色处理；

(3)对步骤(2)中完成脱色处理后的反应液进行过滤，再依次进行超滤和纳滤处理；

(4)将步骤(3)中纳滤处理后得到的滤液在减压浓缩后，得浓缩液，进行降温结晶处理，降温结晶时采用梯度降温，析出晶体，过滤、干燥，得到NADH。

优选地，所述步骤(1)中用陶瓷膜进行过滤；和/或

步骤(2)中利用活性炭对步骤(1)收集得到的上清液进行脱色处理；和/或

步骤(3)中对步骤(2)中完成脱色处理后的反应液进行过滤除去活性炭。

优选地，所述步骤(1)中上清液中NADH的浓度为30-60g/L；和/或

所述陶瓷膜孔径为30nm-100nm，过滤温度为20-30℃，过膜压力为0.1-0.2Mpa。

优选地，在利用活性炭对步骤(1)收集得到的上清液进行脱色处理前，先将上清液pH值调节至5-7.0；优选地，pH为6.0。