[发明专利]一种基于斑马鱼平台筛选抗血管生成化合物或评价化合物抗血管生成效果和毒性作用的方法

权利要求书

1.一种基于斑马鱼平台筛选抗血管生成化合物或评价化合物抗血管生成效果的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)将内皮细胞中表达增强的绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼的胚胎于受精后24h时用蛋白酶去绒毛膜；

b)去绒毛的胚胎用含有0.003％苯基-1-硫脲的E3培养液培养；

c)在受精后1d和4d，将胚胎暴露于受试化合物中，并用胚胎培养基和0.1％DMSO分别处理斑马鱼胚胎作为空白对照和媒介物对照；受试化合物处理24h后，麻醉胚胎并捕获其图像，观察体节血管长度来分析图像，以确定受试化合物的抗血管生成作用；

d)在受精后2.5d，将胚胎暴露于受试化合物中，并用胚胎培养基和0.1％DMSO分别处理斑马鱼胚胎作为空白对照和媒介物对照；受试化合物处理36h后，麻醉胚胎并捕获其图像，测量肠下血管的面积来分析图像，以确定受试化合物的抗血管生成作用；

e)在受精后2.5d，将胚胎暴露于受试化合物中，并用胚胎培养基和0.1％DMSO分别处理斑马鱼胚胎作为空白对照和媒介物对照；受试化合物处理36h后，麻醉胚胎并捕获眼底血管的图像，测量视网膜血管的面积来分析图像，以确定受试化合物的抗血管生成作用。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括以下步骤：在受精后24h，用蛋白酶将胚胎去绒毛膜，去绒毛的胚胎用E3培养液培养，并加入受试化合物，受试化合物处理24小时后，观察并记录胚胎的存活数、畸形数、是否出现心包水肿、心率减慢等毒性反应，以评估受试化合物的毒性。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述蛋白酶用量为1mg/mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)中，通过立体荧光显微镜观察体节血管长度。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤d)和e)中，使用Imag J软件测量血管的面积。