[发明专利]一种利用甘草内生真菌发酵工业大麻的方法

说明书

一种利用甘草内生真菌发酵工业大麻的方法，涉及甘草内生真菌的应用，尤其涉及一种利用甘草内生真菌发酵工业大麻的方法。是要解决现有方法生产CBD的产率不高的技术问题。方法：一：取干燥的工业大麻叶，粉碎，过筛，将大麻叶粉末置于容器内，加水，密封，灭菌作为底物；二：将甘草内生真菌RP4接种于PDA的斜面培养基，恒温培养，得到活化后的甘草内生真菌RP4，与无菌水混合，得到菌悬液；三：将菌悬液加入到底物中，置于空气浴摇床中进行发酵培养，即完成工业大麻的发酵。采用甘草内生真菌RP4发酵工业大麻后可以高效生产CBD原料，最大化利用工业大麻资源。此外，经甘草内生真菌RP4发酵后的工业大麻发酵，抗氧化活性显著增强。

技术领域

本发明涉及甘草内生真菌的应用，尤其涉及一种利用甘草内生真菌发酵工业大麻的方法。

背景技术

大麻(Cannabis sativa L.)为桑科(Moraceae)大麻属(Cannabis)的一年生草本植物。其中，植物体内THC含量低于0.3％的大麻称为工业大麻。大麻二酚(CBD)作为工业大麻中的非成瘾性成分，是CB₁和CB₂受体的拮抗剂，不仅可以有效改善THC对机体产生的致幻作用，还以其独特的调节精神作用、治疗精神疾病、抗肿瘤、抗菌等方面的活性，吸引了众多学者的关注，现已逐渐成为食品、药品领域中的热点化合物。

CBD最初提取分离自工业大麻植株，但纯度以及含量较低。此后，随着对CBD需求量的增加，研究学者开始致力于CBD的化学合成，但化学合成的CBD产率不高，而且还有副产物生成。

尽管有多种高CBD、低THC的大麻种子资源，但无论应用传统的提取分离工艺直接从工业大麻植株中进行CBD的分离，还是以化学合成的方法生产CBD原料，其产率依然无法满足需求，是有待解决的关键性问题。

发明内容

本发明是要解决现有方法生产CBD的产率不高的技术问题，提供一种利用甘草内生真菌发酵工业大麻的方法。

本发明利用甘草内生真菌发酵工业大麻的方法，包括以下步骤：

步骤一：取干燥的工业大麻叶，粉碎，过筛，将大麻叶粉末置于容器内，加水，密封，然后进行高压灭菌处理，灭菌后取出作为底物，其中底物的质量浓度为0.1～0.5g/mL；

步骤二：将甘草内生真菌RP4接种于PDA的斜面培养基，恒温培养，得到活化后的甘草内生真菌RP4，然后将活化后的甘草内生真菌RP4与无菌水混合，得到菌体浓度为1×10⁷CFU·mL^-1的菌悬液；

步骤三：将菌悬液加入到底物中，置于空气浴摇床中进行发酵培养，时间为12h～108h，即完成工业大麻的发酵。

步骤二所述甘草内生真菌RP4为枝顶孢菌(Acremonium dichromosporum)RP4，已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No：M 2012048，保藏地址为武汉市武汉大学，保藏日期为2012年2月29日。并已经于其他专利文件中公开。

本发明还提供所述甘草内生真菌在发酵工业大麻提高大麻二酚含量中的应用。

本发明还提供所述甘草内生真菌在发酵工业大麻提高大麻抗氧化活性中的应用。

本发明的有益效果：

本发明发现了甘草内生真菌RP4的新用途，即可用于作为发酵菌株，发酵工业大麻。

采用甘草内生真菌RP4作为发酵菌株，以该菌株发酵工业大麻后，可定向提高其CBD含量。因此，采用甘草内生真菌RP4发酵工业大麻后可以高效生产CBD原料，最大化利用工业大麻资源。此外，经甘草内生真菌RP4发酵后的工业大麻发酵，其抗氧化活性显著增强，说明工业大麻发酵后有望作为抗氧化剂进行开发利用。

附图说明