[发明专利]透明质酸-ES2-AF肽偶联物及其制备方法和应用

说明书

本申请提供透明质酸‑ES2‑AF肽偶联物及其制备方法和应用，所述透明质酸‑ES2‑AF肽偶联物包含ES2‑AF肽和透明质酸(HA)，和由4‑羧基苯甲醛(CBA)与己二酸二酰肼(ADH)形成的连接桥，其中，所述连接桥将ES2‑AF肽和透明质酸相连。本发明提供的透明质酸‑ES2‑AF肽偶联物具有良好的稳定性和生物活性，与ES2‑AF肽以及HA‑ES2‑AF偶联物相比，其稳定性更高，生物活性更强，因此具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本申请涉及生物医药技术领域，具体涉及透明质酸-ES2-AF肽偶联物及其制备方法和应用。

背景技术

本发明背景技术中公开的信息旨在增加对本发明总体背景的理解，而该公开不应必然被视为承认或以任何形式暗示该信息已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

内皮抑素(Endostatin，ES，“IVRRADRAAVP”)最初是从培养的鼠血管内皮细胞瘤细胞系的上清液中分离出来的，一种新型的含有183个氨基酸、分子量为20kDa血管生成抑制剂，具有抑制肿瘤血管生成的能力，表现出强大的抗内皮细胞活性，包括抑制内皮细胞增殖、迁移、粘附等。引入VEGF受体1的选择性拮抗六肽Anti-Flt1(“GNQWFI”)可以更好地靶向于肿瘤血管内皮细胞的VEGF受体，抑制内皮细胞迁移和管腔形成。现有ES-2与Anti-Flt1通过五个甘氨酸连接架桥化学固相合成的ES2-AF肽可以通过多靶点共同作用更好的抑制肿瘤血管生成。虽然ES2-AF肽链延长，但仍因体内半衰期短较短体、稳定性较差等缺点，而应用受到限制。

发明内容

为了改善现有技术的不足，本发明提供了一种透明质酸-ES2-AF肽偶联物及其制备方法和应用。本发明通过以己二酸二酰肼(Adipic acid dihydrazide,ADH)与4-羧基苯甲醛(4-Carboxybenza-ldehyde,CBA)相连得到的衍生物作为酸敏感连接桥，该连接桥简称为ADH-CBA，将化学固相合成的抗血管内皮生成的ES2-AF肽连接到亲水性的透明质酸(Hyaluronic acid,HA)分子骨架上，从而成功制备得到透明质酸-ES2-AF肽偶联物，其具有良好的稳定性和生物活性，因此具有良好的实际应用价值。

具体地，本发明提供了下述的技术特征，以下技术特征的一个或多个的结合构成本发明的技术方案。

在本发明的第一方面，本发明提供了一种透明质酸-ES2-AF肽偶联物，其包含ES2-AF肽和透明质酸(HA)，和由4-羧基苯甲醛(CBA)与己二酸二酰肼(ADH)形成的连接桥(即ADH-CBA)，其中，所述连接桥将ES2-AF肽和透明质酸相连。

在本发明的实施方式中，所述连接桥中，4-羧基苯甲醛与己二酸二酰肼以酰胺键相连。

在本发明的实施方式中，所述连接桥与透明质酸通过酰胺键相连，所述连接桥与ES2-AF肽通过亚胺或甲亚胺键相连。

在本发明的实施方式中，所述ES2-AF肽的序列如SEQ ID NO.1(IVRRADRAAVPGGGGGGNQWFI)所示。

在本发明的一些较优的实施方式中，ES2-AF的分子量为2254.53Da，HA的分子量为57000Da。

本发明所述透明质酸-ES2-AF肽偶联物的结构简式为HA～ADH-CBA～ES2-AF，简称为HEA。在本发明的实施方式中，本发明所述的透明质酸-ES2-AF肽偶联物可以结构简式的形式表示，也可以HEA表示。

在本发明的实施方式中，本发明采用ADH-CBA作为连接桥连接ES2-AF肽和透明质酸，使ES2-AF肽在肿瘤微环境中的酸性条件下可以从HEA偶联物中释放出来，成为游离状态，快速到达肿瘤周围内皮细胞发挥抗血管生成作用。