[发明专利]一种小鼠体细胞核移植胚胎培养液及胚胎培养方法

说明书

本发明公开了一种小鼠体细胞核移植胚胎培养液及胚胎培养方法，属于生物技术领域，小鼠体细胞核移植胚胎培养液包括以下成分：NaB、乙二胺四乙酸二钠、氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、葡萄糖、碳酸氢钠、谷氨酰胺、丙酮酸钠、青霉素、链霉素、氯化钙、牛血清白蛋白、乳酸钠、必需氨基酸、非必需氨基酸、酚红和胚胎水。利用本发明的小鼠体细胞核移植胚胎培养液及培养方法，可以将小鼠胎儿成纤维细胞重构胚的卵裂率56.05％提高到68.28％(P＜0.001)、囊胚率自11.07％提高到49.38％(P＜0.001)，体细胞核移植小鼠的出生率自0.23％提高到1.24％(P＜0.01)，在现有技术的基础上，显著改善了小鼠的胚胎2‑细胞阻滞情况，提高了小鼠体细胞核移植的效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体的说是涉及一种小鼠体细胞核移植胚胎培养液及胚胎培养方法。

背景技术

体细胞核移植是指通过显微操作技术将供体细胞的细胞核注入到去核的卵母细胞中，形成重构胚，最终发育成新个体的技术。自从1997年，体细胞核移植技术在绵羊上取得巨大的成功，在随后的几年时间，先后有十几种核移植动物成功出生。核移植技术的成功说明动物终末分化的体细胞基因组是有全能性的。在这个过程中，供体细胞基因组在受体细胞的转录因子和酶的作用下进行了重编程，去除分化细胞特异性表达的转录本和转录因子，重新建立胚胎细胞特异的DNA甲基化修饰和组蛋白修饰，并表达胚胎特异的转录因子，激活维持胚胎正常发育的基因的表达。探究体细胞核移植的机制有利于我们提高核移植效率，并进一步为医学应用做好准备。

体细胞核移植产生的胚胎可以正常发育并产生具有繁殖能力的个体，但是大部分动物的体细胞核移植动物的效率仍然很低，已经明确小鼠的核移植植入前胚胎会发生2-细胞阻滞，出生率极低。除此之外，很多体细胞克隆动物表现为发育异常，如胎盘巨大，出生缺陷，体质肥胖，过早死亡等。体细胞核移植的效率低下及发育异常是其后续应用的一个最主要的障碍。近些年来，大量研究人员通过各种方法试图提高核移植的效率，包括改进重构胚激活的方法，调整激活时间，缩短体外培养的时间等等，但仍然没有突破性的进展。

因此，提供一种提高体细胞核移植效率的产品或方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种小鼠体细胞核移植胚胎培养液，显著提高了小鼠胎儿成纤维细胞重构胚的卵裂率、囊胚率以及体细胞核移植小鼠的出生率。

发明思路：

由于体细胞高度分化，恢复全能性困难，体细胞核移植是唯一能够使已分化的细胞基因组具有全能性或多能性的再生生物学技术。体细胞核移植作为动物细胞工程技术的常用技术手段，其开发和利用对再生医学有重要意义。然而，体细胞核移植效率极低限制了此技术的实际应用，并在植入前胚胎发育过程中表现出ZGA阶段阻滞的现象。重构胚的体外培养作为核移植技术中不可缺少的一步，培养液的成分及环境对于重构胚的卵裂率、囊胚率及囊胚的质量至关重要，最终影响核移植动物的出生率。近些年来，大量学者对重构胚的体外培养条件进行改善，以期提高核移植重构胚的发育率。但目前为止，不同文献中报道的改进胚胎体外培养条件的方法不同，仍没有很好的培养体系更好地适用于小鼠胎儿成纤维重构胚的体外培养。因此，筛选出一套高效的体外胚胎培养系统十分必要。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种小鼠体细胞核移植胚胎培养液，包括以下成分：丁酸钠(即NaB)、乙二胺四乙酸二钠、氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、葡萄糖、碳酸氢钠、谷氨酰胺、丙酮酸钠、青霉素、链霉素、氯化钙、牛血清白蛋白、乳酸钠、必需氨基酸、非必需氨基酸、酚红和胚胎水。