[发明专利]一种用于鉴定墨兰蝶瓣相关性状的引物、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种用于鉴定墨兰蝶瓣相关性状的引物、试剂盒及方法。本发明通过比对不同瓣型的墨兰品种中的CsAGL6‑1基因序列的差异，发现了可用于准确地鉴定墨兰蝶瓣性状的功能性分子标记，在此基础上提供了一种用于鉴定墨兰蝶瓣相关性状的引物、试剂盒和方法，用于墨兰蝶瓣品种的鉴定。与传统的鉴别蝶瓣墨兰品种的的方法相比，本发明所述鉴定方法的耗时短、准确率高，操作简便，适用于墨兰种质资源的收集和鉴定，同时还可应用于墨兰分子标记辅助育种，从而提高育种效率、降低育种成本。

技术领域

本发明属于农业生物技术领域。更具体地，涉及一种用于鉴定墨兰蝶瓣相关性状的引物、试剂盒及方法。

背景技术

墨兰(Cymbidium sinense)为兰属植物，是我国传统观赏兰之一，因其花期适逢传统节日春节，继而发展成了产业化程度最高的兰花品种之一。墨兰花被片的形态及伸展姿态变化十分丰富，出现了更具观赏性的瓣型变异，形成了独特的花艺，其中一种瓣型变异为外轮花被片或侧瓣呈现不同程度的唇瓣化，由此产生蝶瓣品种。传统杂交育种是获得墨兰蝶瓣品种的主要途径之一，但传统的瓣型选择通常需要等植株开花之后再根据花被片的形状变异来进行，墨兰从播种到开花需要数年时间。因此，迫切需要开发一种瓣型早期检测方法。

2017年5月31日，中国专利CN 106755526A公开了一种墨兰“唇瓣和花瓣萼片化”性状相关的功能性分子标记及其鉴定方法，但目前还未见墨兰蝶瓣性状相关的功能性分子标记，或用于鉴定墨兰蝶瓣性状的引物、试剂盒、方法等的报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供一种用于鉴定墨兰蝶瓣相关性状的引物、试剂盒及方法。

本发明的第一个目的是提供一种用于鉴定墨兰蝶瓣相关性状的PCR引物。

本发明的第二个目的是提供所述PCR引物在鉴定墨兰蝶瓣品种中的应用。

本发明的第三个目的是提供所述PCR引物在制备鉴定墨兰蝶瓣品种的产品中的应用。

本发明的第四个目的是提供一种用于鉴定墨兰蝶瓣品种的试剂盒。

本发明的第五个目的是提供一种墨兰蝶瓣品种的鉴定方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

MADS-box基因CsAGL6-1主要在墨兰的萼片中高表达，但本发明通过对不同瓣型的墨兰品种的分析发现，CsAGL6-1在墨兰蝶瓣品种“文山奇蝶”的各花器官中几乎都不表达。将墨兰普通品种“企黑”和蝶瓣品种“文山奇蝶”中的CsAGL6-1基因序列进行比对分析发现，墨兰蝶瓣品种“文山奇蝶”的CsAGL6-1基因有两个拷贝，其中一个拷贝的ORF序列与普通品种“企黑”的CsAGL6-1完全相同，而另一个拷贝的ORF序列出现176bp的缺失，由此发现了可用于准确地鉴定墨兰蝶瓣性状的功能性分子标记，并在此基础上开发出了一种可用于快速、准确地鉴定墨兰蝶瓣相关性状的PCR引物。

本发明提供了一种用于鉴定墨兰蝶瓣相关性状的PCR引物，其序列如SEQ ID NO.1～2所示。

本发明同时申请保护SEQ ID NO.1～2所示引物在鉴定墨兰蝶瓣品种和/或在制备鉴定墨兰蝶瓣品种的产品中的应用。

本发明还提供了一种用于鉴定墨兰蝶瓣品种的试剂盒，其包含SEQ ID NO.1～2所示引物。

优选地，所述试剂盒中还包含PCR扩增所需试剂。

本发明还提供了一种墨兰蝶瓣品种的鉴定方法，其包含以下步骤：

S1.提取待鉴定样本的基因组DNA；

S2.以步骤S1所得DNA为模板，用SEQ ID NO.1～2所示引物进行扩增；