[发明专利]奥泽沙星中N-亚硝基二甲胺含量的测定方法

说明书

本发明提供了一种奥泽沙星中N‑亚硝基二甲胺含量的测定方法，其中包括：将奥泽沙星样品溶解于强碱溶液与甲醇的混合溶剂中，加入二氯甲烷和无机盐，充分振荡，静置分层，取下层二氯甲烷相作为供试品溶液，采用气相‑质谱法检测样品中N‑亚硝基二甲胺的含量。该方法检测准确度和灵敏度高、操作简单方便，方法回收率良好，为奥泽沙星产品的质量控制提供了依据。

技术领域

本发明属于药物检测分析技术领域，具体涉及一种奥泽沙星中N-亚硝基二甲胺含量的测定方法。

背景技术

奥泽沙星(Ozenoxacin)是Ferrer公司研发的非氟化喹诺酮抗菌素，用于治疗脓疱性皮炎和其他皮肤感染，包括革兰氏阳性的皮肤和软组织感染。奥泽沙星的作用机制为抑制细菌DNA复制酶，DNA促旋酶A和拓扑异构酶IV。奥泽沙星于2015年9年获日本厚生劳动省批准，成为全球首次批准的新分子实体，于2017年12月11日获得美国FDA批准上市。奥泽沙星的化学名为1-环丙基-8-甲基-7-[5-甲基-6-(甲基氨基)吡啶-3-基]-4-氧代-1,4-二氢喹啉-3-羧酸，其结构式如下所示：

由于奥泽沙星的合成工艺中使用到N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，因此存在N-亚硝基二甲胺(NDMA)的风险。N-亚硝基二甲胺属于潜在遗传毒性杂质，其含量超标将严重威胁糖尿病患者的健康。美国FDA将NDMA已被分类为2A类致癌物质。根据ICH相关规定，人对N-亚硝基二甲胺的最大摄入量为96ng/d，奥泽沙星的最大日使用量为200mg，96ng/200mg＝0.48ppm，即奥泽沙星中N-亚硝基二甲胺的限度为0.48μg/g。因此，需要对奥泽沙星中残留的N-亚硝基二甲胺含量进行精确测定研究。

FDA、EP、中国药典和中国食品药品检定研究院均有发布关于NDMA的气相质谱分析方法。FDA的HS-GCMS测定亚硝胺，使用N-甲基吡咯烷酮(NMP)做样品溶剂，顶空分析线性范围在0.025μg～100μg，但奥泽沙星在N-甲基吡咯烷酮中溶解度低，达不到其检测所需要的浓度水平；中国药典的GCMS液体进样法测定亚硝胺，选择甲醇做样品溶剂，0.03μg/mL NDMA的信号噪音比(S/N)为62.1。FDA、中国食品药品检定研究院和EP相继发布了GC-MSMS直接进样法测定亚硝胺类物质(NDMA、NDEA、NDBA、NAIPA、NEIPA)，其中，盐酸二甲双胍中N-亚硝基二甲胺推荐检测方法2中，选择1N盐酸溶解样品，二氯甲烷萃取后直接进样，选择GC-MSMS，进样体积2μl，脉冲不分流进样，线性范围可以做到0.25ng/mL～50ng/mL。但是奥泽沙星1moL/L盐酸溶液中溶解度小于10mg/mL，该较低的溶解度无法满足N-亚硝基二甲胺检测的灵敏度。此外，奥泽沙星在7％磷酸溶液中略溶，在1moL/L氢氧化钠溶液中溶解度小于30mg/mL，在水中几乎不溶。

综上，目前公开的NDMA分析方法无法准确检测奥泽沙星中NDMA的含量，故寻找一种操作简单、准确度和灵敏度高、适合工业生产的N-亚硝基二甲胺含量的测定方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简单，检测准确度和灵敏度高，适合工业生产的奥泽沙星中N-亚硝基二甲胺含量的测定方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种奥泽沙星中N-亚硝基二甲胺含量的测定方法，其中包括：将奥泽沙星样品溶解于强碱溶液与甲醇的混合溶剂中，加入无机盐和二氯甲烷，充分振荡，静置分层，取下层二氯甲烷相作为供试品溶液，采用气相-质谱法检测样品中N-亚硝基二甲胺的含量。

作为优选，奥泽沙星中N-亚硝基二甲胺含量的测定方法，包括如下步骤：

(a)供试品溶液制备：称取奥泽沙星样品溶解于强碱溶液与甲醇的混合溶剂中，加入无机盐和二氯甲烷，充分振荡，静置分层，取下层二氯甲烷相，作为供试品溶液；