[发明专利]一种从牛、驴皮肤中提取基质凝胶的方法

权利要求书

1.一种从牛、驴皮肤中提取基质凝胶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、取牛或驴的皮肤组织，常温条件下用洗涤2-3次，去除血渍，在4℃条件下剔除皮下组织，在pH为7.4的NaCl缓冲液中搅拌进行脱细胞。

B、将步骤A中处理过的皮肤组织4℃条件下物理破碎，加入pH为7.4的2M尿素缓冲液，在4℃条件下打成匀浆，4℃摇床震荡3d。

C、取震荡后的皮肤匀浆，在4℃16000rpm条件下离心5min，取上层清液，在TBS缓冲液和DMEM培养基中透析，得到的提取液即为皮肤凝胶。

2.根据权利要求1中所述的一种从牛、驴皮肤中提取基质凝胶的方法，其特征在于，脱细胞水溶液并不局限于高浓度NaCl溶液、乙醇或者丙酮中的一种或多种。基质提取液也不局限于尿素缓冲液。

3.根据权利要求1所述的一种牛或驴皮肤凝胶制备的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)室温条件下取新鲜牛或驴皮肤组织，在4℃条件下剔除皮肤皮下脂肪组织，置于蒸馏水中冲洗5min后，将皮肤组织置于溶液中进行脱细胞处理，获得脱细胞皮肤基质。

(2)4℃条件下将皮肤进行物理破碎，加入等体积质量的尿素缓冲液，在4℃破碎机中打成匀浆，4℃摇床中震荡一定的时间，制成基质混合液。

(3)将震荡后的基质混合液分装至1ml离心管中，低温高速条件下离心一定时间，取其上层清液，得到皮肤凝胶初溶液。

4)将得到的皮肤凝胶初溶液转移至处理过的特定透析袋中，置于TBS缓冲液中，在4℃无菌条件下进行低速震荡，一段时间的透析后，得到皮肤凝胶溶液。

4.根据权利要求书3所述的一种从牛、驴皮肤中提取基质凝胶的方法，所述的皮肤组织脱细胞处理是将皮肤组织置于3.4M的NaCl缓冲液(pH为7.4)中充分浸泡10min，并不停搅拌；所述的尿素缓冲液为2M尿素缓冲液(pH为7.4)；所使用的透析袋载留分子量为7000。

5.根据权利要求书3所述的一种从牛、驴皮肤中提取基质凝胶的方法，其特征在于，所述的皮肤凝胶的性质为4℃为水溶液，37℃条件下形成凝胶；其储存条件为-20℃。

6.根据权利要求书3所述的一种从牛、驴皮肤中提取基质凝胶的方法，其特征在于，所得到的皮肤凝胶无细胞及核酸的存在。

7.根据权利要求书3所述的一种从牛、驴皮肤中提取基质凝胶的方法，其特征在于，所得到的皮肤凝胶经过1:1、1:2和1:3稀释以后，同样保持着在4℃情况下为水溶液，37℃条件下形成凝胶的性质。

8.根据权利要求书3所述的一种从牛、驴皮肤中提取基质凝胶的方法，其特征在于，所得到的皮肤凝胶可使细胞完成三维生长。

9.根据权利要求书3所述的一种从牛、驴皮肤中提取基质凝胶的方法，其特征在于，得到的皮肤凝胶可保持干细胞的多能性。