[发明专利]一种肿瘤细胞快检电化学生物传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种肿瘤细胞快检电化学生物传感器，其特征在于，包括柔性丝网印刷电极以及沉积在柔性丝网印刷电极表面的金纳米颗粒，所述金纳米颗粒的表面修饰有巯基化叶酸分子，且所述柔性丝网印刷电极表面被牛血清白蛋白封闭；

或者包括柔性丝网印刷电极以及修饰在柔性丝网印刷电极表面的金纳米颗粒-巯基化叶酸分子复合物，且所述柔性丝网印刷电极表面被牛血清白蛋白封闭。

2.一种制备如权利要求1所述的肿瘤细胞快检电化学生物传感器的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤一、采用电沉积法将氯金酸溶液滴加于柔性丝网印刷电极SPE的表面，并沉积形成金纳米颗粒Au Nps，得到Au Nps-SPE；

步骤二、采用滴涂法将巯基化叶酸分子溶液滴加于步骤一中得到的Au Nps-SPE的表面，使得巯基化叶酸分子Fa-PEG-SH连接在Au Nps的表面上进行修饰，得到Fa-PEG-SH-AuNps-SPE；

步骤三、将牛血清白蛋白溶液滴加于步骤二中得到的Fa-PEG-SH-Au Nps-SPE上进行封闭，然后采用磷酸盐缓冲溶液进行清洗，得到电化学生物传感器。

3.一种制备如权利要求1所述的肿瘤细胞快检电化学生物传感器的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤一、采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备金纳米颗粒Au Nps，然后将Au Nps溶液加入到巯基化叶酸分子Fa-PEG-SH溶液中搅拌，得到金纳米颗粒-巯基化叶酸分子复合物Fa-PEG-SH-Au Nps溶液；

步骤二、依次采用体积分数75％的乙醇溶液和水对柔性丝网印刷电极SPE进行清洗，并采用氮气吹干；

步骤三、采用滴涂法将步骤一中得到的Fa-PEG-SH-Au Nps溶液滴加于步骤二中经吹干后的SPE的表面，使得Fa-PEG-SH-Au Nps修饰在SPE的表面上，得到Fa-PEG-SH-Au Nps-SPE；

步骤四、将牛血清白蛋白溶液滴加于步骤三中得到的Fa-PEG-SH-Au Nps-SPE上进行封闭，然后采用磷酸盐缓冲溶液进行清洗，得到电化学生物传感器。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤一中所述氯金酸溶液的浓度为2.5mmol/L～3.0mmol/L。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤二中所述巯基化叶酸分子溶液的浓度为50μmol/L～150μmol/L。

6.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，步骤三中所述牛血清白蛋白溶液的浓度为0.01mg/mL～10mg/mL，所述封闭的时间为0.5h～1h。

7.一种如权利要求1所述的肿瘤细胞快检电化学生物传感器的应用，其特征在于，该应用的具体过程包括以下步骤：

步骤一、在电化学生物传感器的加样区中滴加样品液，然后放置于培养箱中孵育；

步骤二、将步骤一中经孵育后的电化学生物传感器安装到检测装置中，然后将含有亚铁氰化钾和铁氰化钾的磷酸盐缓冲溶液滴加到电化学生物传感器的加样区；

步骤三、启动与检测装置配套的电化学工作站，对步骤二中滴加了磷酸盐缓冲溶液的电化学生物传感器的加样区进行电化学阻抗检测，获得电化学阻抗值，并进行输出、记录和存储。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤一中所述样品液加入量为300μL；所述孵育的温度为37℃，时间为0.5h～1h。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤二中所述磷酸盐缓冲溶液中亚铁氰化钾与铁氰化钾的浓度均为1mmol/L，磷酸盐缓冲溶液的滴加量为200μL。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤三中所述电化学阻抗检测采用的扫描频率为10mHz～100kHz，在开路电势下施加5mV的AC扰动。