[发明专利]腐霉利、克百威和多菌灵三联免疫层析检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供一种腐霉利、克百威和多菌灵三联免疫层析检测试剂盒及检测方法。所述试剂盒包括样品提取净化管、带反应孔的反应基板和腐霉利、克百威和多菌灵三联免疫层析检测试纸条。本发明提供的三合一胶体金免疫层析检测试剂盒，可以实现现场、多通量、快速准确地对蔬菜中残留的腐霉利、克百威和多菌灵进行同时提取、净化和检测，大幅简化前处理流程，提高检测效率，为食品安全生产、基层监管、食品稽查、大型活动保障等提供有力技术支撑。

技术领域

本发明涉及农药残留检测技术领域，具体地说，涉及一种腐霉利、克百威和多菌灵三联免疫层析检测试剂盒及检测方法。

背景技术

腐霉利(Procymidone)，化学名称N-(3，5-二氯苯基)-1，2-二甲基环丙烷-1，2-二甲酰基亚胺，是一种低毒性杀菌剂，可抑制菌体内甘油三酯的合成。克百威(Carbofuran)，化学名称2，3-二氢-2，2-二甲基-7-苯并呋喃基甲氨基甲酸酯，是一种氨基甲酸酯类杀虫剂和杀线虫剂。多菌灵(Carbendazin)，化学名称2-(甲氧基氨基甲酰)苯并咪唑，是一种高效低毒杀菌剂，可用于防治多种植物病害。腐霉利、克百威和多菌灵是植物栽培过程中常用的农药。目前蔬菜中腐霉利、克百威、多菌灵农药残留的检出率高，不合格率也高，且现有检测方法相对繁琐。

根据国家标准，腐霉利的检测方法是气相色谱-质谱联用法，克百威的检测方法是液相色谱-柱后衍生法，多菌灵现行有效的检测方法是液相色谱-串联质谱法。上述方法虽然稳定性好、准确率高、重复性强，但是需要昂贵的仪器设备，专业的操作人员以及复杂的前处理过程，对环境不友好、无法满足及时检出、现场办公、现场执法的要求。并且前处理方法和使用的仪器设备均有不同，因此对几种农残同时检测的目标，更是难以实现。

在快检方法中，应用较多的有表面增强拉曼光谱法、免疫层析试纸快速检测法。但是很多检测对象没有拉曼信号，而免疫层析试纸检测对象单一，且不同检测对象的前处理方法也不尽相同，不利于几种农残的同时检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种腐霉利、克百威和多菌灵三联免疫层析检测试剂盒及检测方法。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种腐霉利、克百威和多菌灵三联免疫层析检测试纸条，包括样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和底板，所述硝酸纤维素膜从样品垫到吸水垫的方向上依次设有三条检测线和一条质控线，三条检测线分别包被有腐霉利半抗原-载体蛋白偶联物、克百威半抗原-载体蛋白偶联物和多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物，所述质控线包被有羊抗鼠多克隆抗体。

所述样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次以2-3mm的间距交互层叠黏贴在底板上。

检测线上包被的腐霉利半抗原-载体蛋白偶联物的浓度为0.10-0.20mg/mL，优选0.15mg/mL。

检测线上包被的克百威半抗原-载体蛋白偶联物的浓度为0.25-0.8mg/mL，优选0.6mg/mL。

检测线上包被的多菌灵半抗原-载体蛋白偶联物的浓度为0.25-0.6mg/mL，优选0.5mg/mL。

质控线上包被的羊抗鼠多克隆抗体的浓度为0.25mg/mL。

腐霉利半抗原、克百威半抗原、多菌灵半抗原的结构分别如式1)～式3)所示：

式1)腐霉利半抗原

式2)克百威半抗原

式3)多菌灵半抗原

优选地，载体蛋白为牛血清蛋白。

硝酸纤维素膜上的各检测线之间，以及靠近吸水垫端的检测线与质控线之间的距离均为4-5mm，优选4.3mm。在本发明中，如果相邻的两条检测线距离太近，显色会有干扰；如果距离太远，则层析时间过长，且需要更多的检测液。