[发明专利]蚕虫草活性成分的制备工艺及其用途

说明书

本发明公开了一种蚕虫草活性成分的制备工艺及其用途，包括以下步骤：(1)蚕虫草粗提液的制备；(2)虫草素‑腺苷混合标准溶液的制备；(3)蚕虫草中活性成分的分析：a、HPLC法分析样品粗提液；b、制备液相分离纯化虫草素等活性成分，所述活性成分包括腺苷、虫草素、化合物I和化合物Ⅱ。本发明的有益效果是：经虫草素、化合物Ⅰ和化合物Ⅱ处理后，HepG2细胞的相对活力显著下降(p0.05)，呈浓度依赖，并且虫草素和化合物I对HepG2细胞的抑制作用与药物作用时间呈正相关；3种药物均能抑制HepG2细胞的增殖，抑制作用效果的顺序依次为：化合物Ⅰ虫草素化合物Ⅱ；3种药物均能抑制HCT‑116细胞的增殖，抑制作用效果的顺序依次为：化合物Ⅱ化合物I虫草素。

技术领域

本发明涉及蚕虫草活性成分的研究技术领域,更具体的说是涉及蚕虫草活性成分的制备工艺及其用途。

背景技术

蚕虫草是一种由蚕虫草菌感染家蚕幼虫并产生子实体的一种虫菌复合体。家蚕是最容易饲养、培育规模最大、形态与冬虫夏草的虫体接近的虫草载体；蚕虫草是冬虫夏草合适的替代品，且家蚕是可以大批量人工词养的鳞翅目昆虫，容易规模化栽培、药用价值高。而现在的对蚕虫草活性成分的提取具有一定的局限性，因此对蚕虫草活性成分的提供还具有一定的市场应用潜力。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于提供一种提供了一种蚕虫草活性成分的制备工艺及其用途。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

蚕虫草活性成分的制备工艺，其特征在于，该蚕虫草活性成分的制备工艺包括以下步骤：

(1)蚕虫草粗提液的制备：将蚕虫草真空冷冻干燥48h，用粉碎机粉碎后，过40目筛，制成蚕虫草冻干粉末，在-18℃，避光、密封储存备用；准确称取一定量蚕虫草冻干粉末，按照不同料液比，加入不同浸提溶剂，在不同提取温度和提取时间条件下进行恒温水浴搅拌提取，收集滤液，滤渣进行二次提取，合并滤液，减压浓缩，最终得到实验组蚕虫草粗提液；

(2)虫草素-腺苷混合标准溶液的制备：取等量虫草素和腺苷的标准储备液混匀，配成一定浓度的虫草素-腺苷混合标准溶液；

(3)蚕虫草中活性成分的分析：

a、HPLC法分析样品粗提液：a1：样品处理：取蚕虫草粗提液和腺苷-虫草素混合标准溶液各1mL，过0.22μm滤膜，注入液相进样瓶，待HPLC分析；a2：色谱条件：所用仪器：Waters Alliance e2695；C18-HCE分析型色谱柱(4.6×2.5mm，5μm，100A)；流速：0.6mL/min；检测：UV(260nm)；柱温：35℃±5℃；进样量：10μL；洗脱条件：0min～30min，甲醇0％～10％，超纯水(含0.5％CF3COOH)100％～90％，梯度洗脱；

b、制备液相分离纯化虫草素等活性成分：b1：一维制备：C18制备型色谱柱(50×250mm，10μm)；流速60mL/min；上样量50mL；洗脱条件：甲醇:超纯水＝15:85(V:V)，等度洗脱，根据谱图出峰情况，按照A、B、C、D号峰，分别收集各馏分，采用HPLC分析方法，对一维制备所得馏分A、B、C、D进行分析；其中，馏分A中含有多种组分；馏分B和馏分C分别为腺苷和虫草素；b2：二维制备：利用C18-HCE制备型色谱柱(50×230mm，10μm)；流速50mL/min；洗脱条件：0min～40min，甲醇0％～90％，超纯水100％～10％，梯度洗脱，对一维制备所得馏分A进行二维制备，于28min～32min范围内收集馏分E；采用HPLC分析方法，对二维制备所得馏分E进行分析得到化合物I和化合物Ⅱ。

优选的，在上述一种杭州中非生物科技有限公司中，所述化合物I的结构式为：

所述化合物II的结构式为：