[发明专利]检测染色体畸变的方法

说明书

本发明涉及一种鉴定染色体畸变，特别是染色体结构和/或数目畸变，且优选染色体结构畸变的方法，所述方法是利用原位杂交，通过检测生物样品中，优选一个或多个细胞中和/或一个或多个细胞核中的染色体和/或DNA区域。

本申请是申请日为2016年6月23日、申请人为兹托视觉有限公司、发明名称为“检测染色体畸变的方法”的中国专利申请201680034524.X的分案申请。

技术领域

本发明涉及染色体异常(chromosome anomalies)或染色体畸变(chromosomeaberrations)检测方法的技术领域。

具体地，本发明涉及一种通过原位杂交检测染色体畸变的方法。此外，本发明涉及一种适用于检测染色体畸变的组合物及其根据本发明的用途。本发明的另一个目的为提供标记有检测标记的位点特异性杂交探针的应用。最后，本发明的一个目的是提供一种用于检测染色体畸变的试剂盒。

背景技术

许多肿瘤疾病是基于染色体结构和数目变异，如易位、倒位、片段重复、缺失、插入、复制、非整倍体和扩增。这些变化的检测作为预测、预后或鉴别诊断指标，通常通过原位杂交(ISH)进行。

原位杂交是基于核酸单链特别是DNA单链的互补碱基的杂交或配对，使得样品中特别是组织或细胞制剂中的特异性核酸序列可被检测。为此目的，将直接或间接标记的合成产生的探针与样品的核酸单链杂交并随后检测。

为了检测目的，可以使用荧光标记的核酸片段或荧光标记的杂交探针(荧光ISH(FISH))。此外，可以使用抗原标记的探针，特别是半抗原标记的探针，其随后利用抗体通过显色反应可见，使得光学显微镜分析可以进行((亮场ISH(BrISH))、显色ISH(CISH)、银ISH(SISH))。

FISH的优点为可以同时检测多个基因组区域，以便彼此区分。为此目的，针对不同基因组区域或对其特异的核酸片段由不同的荧光染料进行标记或偶联，在每种情况下，每种荧光染料在吸附光谱和/或发射光谱方面彼此不同。如果这种包含分离的不同单个探针的多色探针用于中期染色体制剂或间期细胞核制剂，可以通过使用特定的显微镜滤光片来分别描绘各个颜色，其将精确定义的光波长范围导入制剂以激发染料，并且还将由染料发射的精确定义的光波长范围导入评估器(称为单带通滤波器组)。此外，还存在允许同时描绘不同荧光染料和由此描述多个核酸片段的滤波器和滤波器组。在两种不同的荧光染料的情况下，例如，一种称为双带通滤波器组。

然而，由于每个特定探针检测的每个基因组区域只能使用一个标记，对于同时描述设置了明确的限定。此外，染料的吸收和发射范围通常彼此靠近，使得它们不能通过显微镜过滤器组彼此分离。由于这些原因，通常在FISH中仅同时分析两种颜色(橙色/红色和绿色)或三种颜色(橙色/红色和绿色同时或与蓝色核反颜色(DAPI)一起)。与FISH可以描述的大致相同的限定也适用于BrISH。这里，现有技术的状态为使用通常选自生物素、二硝基苯(DNP)和地高辛组的两种半抗原，以及两种抗体偶联的酶，通常为碱性磷酸酶和过氧化物酶。

所述同时描述或分析的限制对于用于检测染色体结构和数目畸变的探针的组成(组成)或配位有决定性的影响，其可用于诊断细胞位于间期的肿瘤，仅用所谓的位点特异性探针进行，其中有时，所谓的重复序列探针也被用于检测染色体数目突变。

位点特异性探针被认为是处理染色体中选定DNA片段的探针，并被称为基因特异探针或“单拷贝”探针，所述DNA片段通常为单个基因或相邻基因，大小总共高达约1000kb。重复序列特异性探针是处理重复序列并因此处理大小为多个1000kb的区域的探针。例如，这些探针还包括着丝粒探针或α-卫星探针。