[发明专利]一种基于金纳米花技术半定量检测黄曲霉毒素的试纸条

权利要求书

1.一种基于金纳米花技术半定量检测黄曲霉毒素的试纸条，其特征在于：所述试纸条包括塑料外壳和免疫层析试纸条；其中，所述的免疫层析试纸条包括吸水垫、检测垫、免疫探针结合垫和样品垫；所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，质控线上包被有羊抗小鼠IgG，检测线上包被有黄曲霉毒素AFB₁-牛血清白蛋白偶联物AFB₁-BSA；所述免疫探针结合垫上涂有抗黄曲霉毒素AFB₁单克隆抗体3A1与金纳米花形成的金纳米花免疫探针AuNF-mAb的稀释液；所述抗黄曲霉毒素AFB₁单克隆抗体3A1由抗黄曲霉毒素AFB1单克隆抗体杂交瘤细胞株3A1分泌产生。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述金纳米花免疫探针AuNF-mAb的稀释液的制备方法如下：通过种子生长法，以直径为20nm的胶体金为晶核，对苯二酚介导制备花瓣状金纳米花AuNF；取金纳米花AuNF 20mL，向其中加入60μL 0.1M的K₂CO₃，然后缓慢滴加120μL 1.5mg/mL的抗AFB₁单克隆抗体3A1，维持搅拌1h，按终浓度1wt%加入牛血清白蛋白，继续搅拌30min，按终浓度0.5vol%加入PEG20000，维持搅拌30min；静置于4℃平衡体系过夜；离心纯化探针，按1/10体积重悬，得到金纳米花免疫探针AuNF-mAb的稀释液；其中，所述重悬液配方为：100mL pH7.4 0.01M的PBS缓冲液中加入0.5g牛血清白蛋白、0.5g甘氨酸、5g海藻糖和0.5mL Tween20。

3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述抗黄曲霉毒素AFB₁单克隆抗体3A1的制备方法如下：将抗黄曲霉毒素AFB1单克隆抗体杂交瘤细胞株3A1以1×10⁶ cell/只的量注射到用弗氏不完全佐剂预致敏过的9周龄的Balb/c小鼠腹腔中，待小鼠腹部明显膨大且腹部皮肤具有紧张感时收集该小鼠的腹水，置于4℃下11000 r/min离心20min，取中间层经过蛋白G亲和层析进行纯化，然后用超纯水透析完全，冷冻干燥，收集冻干粉，即得抗黄曲霉毒素AFB₁单克隆抗体3A1。

4.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述抗黄曲霉毒素AFB1单克隆抗体杂交瘤细胞株3A1已于2021年4月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.21998。