[发明专利]一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法

说明书

一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法，其包括如下步骤，1）将一株海洋假单胞菌即F‑Q127菌种从固体斜面培养基中取适量接种到内装100mL液体培养基的三角瓶中，在28℃、180r·min－1的条件下摇床培养48h，作为种子培养液；2）将该种子培养液按体积分数7%的接种量接种于含150mL液体培养基的三角瓶中，共接种15L，在28℃180r·min－1的条件下摇床培养5d，再对培养液进行萃取，得到菌种发酵液的氯仿萃取物和菌丝体的氯仿萃取物；经薄层检查，菌种发酵液的氯仿萃取物和菌丝体的氯仿萃取物主要斑点相似，将两部分的氯仿萃取物合并得氯仿萃取物；3）对氯仿萃取物采用流式细胞术测定化合物的细胞周期抑制活性，得到环二肽类化合物。

技术领域

本发明涉及环二肽类化合物制备，具体为一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法。

背景技术

蛋白质可由酸、碱或酶水解，在水解过程中蛋白质逐步降解成为蛋白胨、多肽、三肽和二肽等越来越小的蛋白质碎片，直到最后成为氨基酸混合物。

在体内二肽通常能被二肽酶所水解而成为两个游离氨基酸。在体内肠黏膜细胞上也存在着吸收二肽或三肽的耗能主动运转体系，故有二肽吸收入细胞先于游离氨基酸之说。

二肽是一种化合物，是天然氨基酸即阿尔法氨基酸(氨基连在连有羧基的碳上)中的氨基于羧基脱水缩合而成的。其中只含一个肽键即-CO-NH-。可水解。

环二肽本质---氨基酸肽键形成的化合物活性肽，与动物营养、荷尔蒙、酵素抑制、调节免疫、抗菌、抗病毒、抗氧化作用直接。

现在环二肽类化合物类化合物制备不便，产量难以提升，同时制备方法繁琐。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法，有效的解决了现在环二肽类化合物类化合物制备不便，产量难以提升，同时制备方法繁琐的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：本发明包括如下步骤，1）将一株海洋假单胞菌即F-Q127菌种从固体斜面培养基中取适量接种到内装100mL液体培养基的三角瓶中，在28℃、180r·min－1的条件下摇床培养48h，作为种子培养液；

2）将该种子培养液按体积分数7%的接种量接种于含150mL液体培养基的三角瓶中，共接种15L，在28℃180r·min－1的条件下摇床培养5d，再对培养液进行萃取，得到菌种发酵液的氯仿萃取物和菌丝体的氯仿萃取物；经薄层检查，菌种发酵液的氯仿萃取物和菌丝体的氯仿萃取物主要斑点相似，将两部分的氯仿萃取物合并得氯仿萃取物；

3）对氯仿萃取物采用流式细胞术测定化合物的细胞周期抑制活性，得到环二肽类化合物。

有益效果：通过本发明的制备方法，由一株海洋假单胞菌可产出高含量的环二肽类化合物，分别鉴定为环(丙-亮)［cyclo(Ala-Leu)，1］、环(丙-异亮)［cyclo(Ala-Ile)，2］、环(丙-缬)［cyclo(Ala-Val)，3］、环(苯丙-亮)［cyclo(Phe-Leu)，4］、环(丙-脯)［cyclo(Ala-Pro)，5］和环(苯丙-缬)［cyclo(Phe-Val)，通过不同诱导时机目的蛋白的表达实验方法得到：海洋假单胞菌F-Q127生长5h时加入终浓度0.3mmol/L的诱导剂IPTG诱导4h,为目的蛋白表达的最优条件。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式做进一步详细说明。

实施例，本发明提供一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法，包括如下步骤，1）将一株海洋假单胞菌即F-Q127菌种从固体斜面培养基中取适量接种到内装100mL液体培养基的三角瓶中，在28℃、180r·min－1的条件下摇床培养48h，作为种子培养液；