[发明专利]一种检测SIRT7酶活性的荧光多肽底物

权利要求书

1.一种荧光多肽底物检测SIRT7酶去乙酰化活性的方法，其特征在于，包括步骤：

设置待测样品组、空白对照组、阳性药物对照组以及背景对照组；

向所述待测样品组、空白对照组以及阳性药物对照组中分别加入SIRT7酶蛋白、所述荧光多肽底物、NAD⁺并混合均匀，向所述背景对照组中加入所述荧光多肽底物、NAD⁺并混合均匀，其中，所述SIRT7酶蛋白浓度为10-70ng/μL；

取待测样品、空白对照品、阳性药物对照品和背景对照品分别加入相应组别中，混合均匀后，在检测板的孔中共孵育进行反应；

待反应完成后，将检测板置于酶标仪上进行检测，收集不同组别对应的荧光信号强度；

根据荧光信号强度的读值计算酶活；其中，所述荧光多肽底物的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，且所述荧光多肽底物的氨基酸序列N端第18位的赖氨酸的侧链氨基结合有荧光基团，所述荧光基团为7-甲氧基香豆素-4-乙酸。

2.根据权利要求1所述的荧光多肽底物检测SIRT7酶去乙酰化活性的方法，其特征在于，所述阳性药物对照品为尼克酰胺溶液，所述空白对照品和背景对照品均为缓冲液。

3.根据权利要求1所述的荧光多肽底物检测SIRT7酶去乙酰化活性的方法，其特征在于，所述荧光多肽底物浓度为10μM。

4.根据权利要求1所述的荧光多肽底物检测SIRT7酶去乙酰化活性的方法，其特征在于，当所述SIRT7酶蛋白浓度为10-70ng/μL时，反应的剂量-活性线性关系为y=31.88x+2396，R²=0.9742。

5.根据权利要求1所述的荧光多肽底物检测SIRT7酶去乙酰化活性的方法，其特征在于，所述反应在pH为8.0的缓冲液中，温度为37°C的反应体系下进行，反应时间为90min，所述缓冲液包括10mM Tris-HCl、4mM MgCl₂、0.2mM DTT和10%甘油。

6.根据权利要求1所述的荧光多肽底物检测SIRT7酶去乙酰化活性的方法，其特征在于，所述荧光信号强度为荧光基团在激发波长260nm，发射波长300-600nm的荧光信号强度。

7.根据权利要求1所述的荧光多肽底物检测SIRT7酶去乙酰化活性的方法，其特征在于，酶活计算公式为：

酶活=(RLU(样品组)-RLU(背景对照组)) /(RLU(空白对照组)-RLU(背景对照组)) ×100%；其中，RLU表示相对荧光强度的单位，RLU(样品组)为待测样品组或者阳性药物对照组的荧光强度读值，RLU(空白对照组)为空白对照组100%酶活性的荧光强度读值，RLU(背景对照组)为背景对照组的荧光强度读值。

8.一种如权利要求1-7任一所述的荧光多肽底物检测SIRT7酶去乙酰化活性的方法的应用，其特征在于，将所述方法应用于SIRT7去乙酰化机制的研究以及SIRT7靶点小分子药物筛选试剂盒的开发。