[发明专利]由Pri-miRNA编码的多肽在提高葡萄抗寒性能中的应用

说明书

本发明公开了由Pri‑miRNA编码的多肽在提高葡萄抗寒性能中的应用，属于分子生物技术领域。由Pri‑miRNA编码的多肽包括多肽vvi‑miPEP172b、vvi‑miPEP3635和vvi‑miPEP3633a，氨基酸序列分别如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示，可分别由pri‑miR172b、pri‑miR3635和pri‑miR3633a编码。本发明首次鉴定得到三个由pri‑miRNA编码的多肽vvi‑miPEP172b、vvi‑miPEP3633a和vvi‑miPEP3635，不但可以提高自身miRNA的表达水平，还可以提高葡萄的抗寒能力，在葡萄栽培实践中改善葡萄的抗寒能力具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，具体涉及由microRNA的初级转录本Pri-miRNA编码的多肽在提高葡萄抗寒性能中的应用。

背景技术

葡萄是起源最古老的植物之一，我国葡萄栽培历史悠久，总产量位居世界第一位，面积居第二位，鲜食葡萄产量约占世界总产量一半，葡萄产业对我国农民增收、国民经济增长具有重要保障作用。在农业生产中，冷害和冻害是威胁粮食安全的自然灾害之一，在我国葡萄冷害和冻害主要受早春季节“倒春寒”的影响，“倒春寒”是指在早春季节气温回升，植物开始萌芽乃至新叶展开后，地表温度骤降甚至达到0℃以下的现象。当葡萄遭遇“倒春寒”后，容易出现冻芽、冻花、冻果等现象，树势受损，造成果园严重减产。因此，如何减缓这一现象成为葡萄生产中的急迫问题。

通常将氨基酸残疾数目小于100的一类蛋白质称为小肽。目前，在生物体内已经发现了多种与植物激素或者信号分子有相似功能的小肽，它们参与植物生长、发育和环境适应等多个生物学过程。在植物中，小肽通常由蛋白质前体加工而来，或者直接由基因组中的基因编码。近年来发现一类由MIR基因转录的microRNA初级转录本(pre-miRNA)可以编码多肽，叫做miPEP。MiPEP可以正向调控自身MIR的转录，一方面促使miPEP的积累，另一方面提高自身miRNA的表达。在此之前，发明人团队发现葡萄miR171d的初级转录本pri-miR171d产生一个多肽Vvi-miPEP171d1可以促进葡萄组培苗不定根的形成，但关于pri-miRNA编码的多肽在植物遭受冷害时的作用尚未见报道。

发明内容

鉴于葡萄生产上的需求，本发明的目的在于提供由Pri-miRNA编码的多肽在提高葡萄抗寒性能中的应用，包括多肽vvi-miPEP172b、多肽vvi-miPEP3635和多肽vvi-miPEP3633a，氨基酸序列分别如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。

优选地，多肽vvi-miPEP172b、多肽vvi-miPEP3635和多肽vvi-miPEP3633a分别由pri-miR172b、pri-miR3635和pri-miR3633a编码；其中，pri-miR172b、pri-miR3635和 pri-miR3633a的核苷酸全序列分别如SEQ ID No.7、SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示。

优选地，编码多肽vvi-miPEP172b的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

优选地，编码多肽vvi-miPEP3635的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

优选地，编码多肽vvi-miPEP3633a的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

优选地，分别将多肽vvi-miPEP172b、vvi-miPEP3633a和vvi-miPEP3635配制成水溶液并添加到葡萄的组培苗中。

本发明还提供了一种植物表达载体，包含编码多肽vvi-miPEP172b、vvi-miPEP3633a和 vvi-miPEP3635任一所述核苷酸序列。

本发明还提供了一种农杆菌工程菌，含有上述任一所述植物表达载体。