[发明专利]一种人员防护装备防护性能评价用病毒标准物质的定值方法

说明书

本发明提供了一种人员防护装备微生物防护性能评价用病毒标准物质的定值方法，为噬菌斑计数法。将含有噬菌体ΦX174病毒的标准物质复水溶解，培养后计数典型噬菌斑，并结合稀释因子按本发明提供的公式进行计算，可以得到标准物所含噬菌体ΦX174的浓度。本方法可以确保病毒标准物质中的噬菌体ΦX174活菌浓度精准定值，提高人员防护装备性能评价的准确性。

技术领域：

本发明涉及一种人员防护装备防护性能评价用病毒标准物质的定值方法，属于生物安全技术领域。

背景技术：

人员防护装备和设施的防护性能评价中，微生物(如病毒、细菌等)的防护性能评价最为关键。

噬菌体ΦX174是一种空气生物学模式病毒，其粒径集中在27～30nm。由于噬菌体具有培养和计数方法相对简单，实验安全性高，计数效果明显等优点。而且，噬菌体ΦX174具有病毒的共性，又是一种以病毒作为宿主的病毒，因此适合作为生物检测指示病毒，应用于生物安全柜等人员防护装备的防护性能评价中。

含有精确定值的噬菌体ΦX174的标准物质，才能保证可靠地评价人员防护装备的防护性能。为确保噬菌体ΦX174活菌浓度精确定值，提高人员防护装备性能评价的准确性，非常有必要研制一种噬菌体ΦX174标准物质的定值方法。

发明内容

本发明的目的是，对含噬菌体ΦX174活菌的人员防护装备微生物防护性能评价用病毒标准物质，提供一种定值方法。

为实施上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种人员防护装备微生物防护性能评价用病毒标准物质，其特征在于，包括有噬菌体ΦX174。

所述噬菌体ΦX174用1mL稳定剂水溶液复水后，噬菌体ΦX174活菌浓度为1.0×10⁸～9.9×10⁹PFU/mL

所述的标准物质，由两个组分组成：

1)噬菌体ΦX174，为含噬菌体ΦX174菌体和菌体保护剂的冻干物；

2)用于菌体冻干物复水的稳定剂水溶液。

所述菌体保护剂，其成分选自蔗糖、谷氨酸钠、BSA中的一种或多种；所述冻干物的形状，优选为饼状或球状颗粒；

所述稳定剂水溶液，是含无机盐、牛血清白蛋白和抗坏血酸的水溶液。

优选的稳定剂水溶液，含如下质量体积百分比的成分：0.1～1.0％的氯化钠、0.1～1.0％的牛血清白蛋白和0.2～2％的抗坏血酸，其余是水。

制成所述菌体保护剂的原料组成为：蔗糖0～10重量份，谷氨酸钠0～10重量份，牛血清白蛋白0～10重量份；优选的组成为：蔗糖5～7重量份，谷氨酸钠1～2重量份，牛血清白蛋白3～5重量份。

上述标准物质的制备方法，其特征是，用磷酸盐缓冲溶液将噬菌体ΦX174菌体稀释至10⁹级，将配制成新鲜菌匀液与保护剂按照1:1的体积比混合，于-70℃下预冻4h后冻干，得到所述标准物质。

所用的噬菌体ΦX174的培养方法是：挑取宿主菌大肠杆菌13706单噬菌斑落于已高压灭菌的营养肉汤中，36℃±1℃下，180×g摇床培养5h。再加入5ml噬菌体ΦX174菌液，36℃±1℃下，180rpm摇床培养6h。

制备得到的标准物质于-20℃下保存。

所述标准物质的定值方法，为噬菌斑计数法，具体操作如下：

用1mL稳定剂水溶液对标准物质进行复水溶解，充分混匀后制备成S0样品匀液；