[发明专利]一种快速定点突变创制纯合糯性玉米种质的方法及其应用

权利要求书

1.一种快速定点突变创制糯性玉米种质的方法，其特征在于，包括：将mtl突变纯合体且ZmWaxy1基因敲除元件和筛选元件纯合的玉米ZmWaxy1基因编辑单倍体诱导系，或mtl和dmp突变纯合体且ZmWaxy1基因敲除元件和筛选元件纯合的玉米ZmWaxy1基因编辑单倍体诱导系和玉米自交系进行杂交，杂交后代经单倍体筛选与鉴定，获得的单倍体诱导系通过染色体加倍，获得糯性改良的双单倍玉米种质。

2.如权利要求1所述的一种快速定点突变创制糯性玉米种质的方法，其特征在于，所述mtl突变纯合体且ZmWaxy1基因敲除元件和筛选元件纯合的玉米ZmWaxy1基因编辑单倍体诱导系的制备包括以下步骤：

(1)将mtl突变纯合株系筛选出转基因阴性材料；

(2)pCPB-ZmESP：eGFP-HvASP：DsRED双荧光表达载体导入受体材料，筛选得到DFP阳性材料；

(3)ZmWaxy1-CRISPR/Cas9编辑载体导入受体材料，筛选ZmWaxy1-CRISPR/Cas9的阳性材料；

(4)将步骤(1)和(2)筛选出的材料杂交获得F1代材料；

(5)将F1代材料荧光筛选，选择胚部表达绿色荧光并且胚乳表达红色荧光的材料和步骤(3)中携带ZmWaxy1-CRISPR/Cas9转基因成分的阳性材料杂交筛选得到诱导系纯系Hi-Edit3。

3.如权利要求2所述的一种快速定点突变创制糯性玉米种质的方法，其特征在于，所述mtl和dmp突变纯合体且ZmWaxy1基因敲除元件和筛选元件纯合的玉米ZmWaxy1基因编辑单倍体诱导系的制备包括以下步骤：

步骤A：将所述DFP阳性材料和ZmMTL/ZmDMP双基因突变体材料杂交获得F1代材料；

步骤B：将F1代材料荧光筛选，选择胚部表达绿色荧光并且胚乳表达红色荧光的材料与携带ZmWaxy1-CRISPR/Cas9转基因成分的阳性材料杂交筛选得到诱导系纯系Hi-Edit8。

4.如权利要求3所述的一种快速定点突变创制糯性玉米种质的方法，其特征在于，步骤(1)所述筛选通过BAR试纸条进行。

5.如权利要求4所述的一种快速定点突变创制糯性玉米种质的方法，其特征在于，步骤(2)所述受体材料为玉米X249。

6.如权利要求5所述的一种快速定点突变创制糯性玉米种质的方法，其特征在于，所述玉米自交系为B73，159F、159M、4CV或6WC。

7.如权利要求2所述的一种快速定点突变创制糯性玉米种质的方法，其特征在于，所述筛选得到诱导系纯系Hi-Edit3的方法包括以下步骤：

1)PCR扩增测序ZmMTL位点，测序筛选突变纯合株系；

2)再通过ddPCR筛选ZmWaxy1-CRISPR/Cas9转基因元件纯系自交；

3)选择自交果穗上荧光不分离的材料即为Hi-Edit3。

8.如权利要求3所述的一种快速定点突变创制糯性玉米种质的方法，其特征在于，筛选得到诱导系纯系Hi-Edit8的方法包括以下步骤：

1)PCR扩增测序ZmMTL和ZmDMP位点筛选双位点突变纯合株系；

2)再通过ddPCR筛选ZmWaxy1-CRISPR/Cas9转基因元件纯系自交；

3)选择自交果穗上荧光不分离的材料即为Hi-Edit8。