[发明专利]一种肺癌细胞膜包裹精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒及其制备方法

权利要求书

1.一种肺癌细胞膜包裹精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒，其特征在于，包括精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒和肺癌细胞膜包裹层；

所述的精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒中精氨酸脱亚胺酶含量为2-28U/mL，缓冲液pH为5-9，其余各组分重量比为：

所述的肺癌细胞膜，包括小细胞肺癌细胞膜、非小细胞肺癌细胞膜的一种或多种；

所述的一种肺癌细胞膜包裹精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒的制备包括下列步骤：(1)精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒的制备方法：将精氨酸脱亚胺酶溶解于Tris缓冲液中得到精氨酸脱亚胺酶溶液，将处方量的卵磷脂、胆固醇和聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯溶解于10-30mL二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、无水乙醇、甲醇、乙醚中的一种或多种有机溶剂中，旋转蒸发除去有机溶剂形成均匀脂质薄膜，加入精氨酸脱亚胺酶溶液，35-45℃水浴下水合1-3小时，超声0.1-1小时，过0.22-0.45μm微孔滤膜得到乳状液A；取处方量壳聚糖溶解于水相1中得到壳聚糖溶液，在搅拌的条件下，将乳状液A缓慢加入到壳聚糖溶液中，持续搅拌0.5-1.5小时，过0.22-0.45μm微孔滤膜，即得精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒；(2)单一肺癌细胞膜的制备方法：培养并收集肺癌细胞，数量为2000-5000万个，用磷酸盐缓冲液洗涤3-5次，加入0.8-1.0mL含有1％的苯甲基磺酰氟的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽取试剂，混匀后冰浴条件下孵育10-15分钟，超声10-30秒，离心10-15分钟，取上清液，再离心20-40分钟，收集沉淀，分散于水相2，即得肺癌细胞膜；(3)多种肺癌细胞膜的制备方法：按步骤(2)分别制备各种肺癌细胞膜，混匀后备用；(4)将步骤(2)得到的一种肺癌细胞膜或步骤(3)得到的多种肺癌细胞膜在冰浴条件下超声1-2分钟，使用脂质体挤出器过400nm聚碳酸酯膜挤出，来回挤出次数10-20次，再将肺癌细胞膜与精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒以体积比1:2至2:1，混合均匀，使用脂质体挤出器分别通过400nm和200nm聚碳酸酯膜挤出，来回挤出次数10-30次，即得肺癌细胞膜包裹精氨酸脱亚胺酶脂质纳米粒。